关键词：方药研究 / 实验研究 / 配方资产 / 转化沟通 / 3.1 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠免疫器官的重要影响
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3.1 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠免疫器官的重要影响
一般观察可见，荷瘤模型组小鼠第5天起出现皮毛散乱，右前腋部皮下隐约可见瘤体。
裴正学系列方药的研究
进食、水量较前减少，体重下降，精神萎靡，活动欠佳，反应迟钝，造模后第8～10d之间，瘤体增长迅速，表面凹凸不平，可见多个结节，边界不清，到第13～15d全组小鼠出现恶病质，部分小鼠出现腹水，实验结束时解剖模型组小鼠发现瘤体生长旺盛，恶性程度高，而裴氏升血颗粒各剂量组小鼠与模型组比较，毛色较光亮，精神、饮食均较好，瘤体增长较模型组慢。
裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠免疫器官的影响结果显示：荷瘤模型组小鼠胸腺、脾脏体积缩小，重量减轻，个别胸腺分叶不清，呈灰白色，脾脏色变淡红色。而裴氏升血颗粒各剂量组小鼠的胸腺、脾脏的外观与正常组无明显差异。裴氏升血颗粒大、中、小剂量组小鼠胸腺指数均高于模型组，其中大、中剂量组小鼠胸腺指数分别为18.9mg/10g、18.0mg/10g，较模型组分别增长了36.0%、29.5%（p<0.05）。与正常组比较：模型组小鼠胸腺指数明显降低（p<0.01）。裴氏升血颗粒各剂量组小鼠脾脏指数均高于模型组，其中大剂量组小鼠脾脏指数为76.3mg/10g，较模型组增长17.9%（p<0.05）。模型组小鼠脾脏指数较正常组明显降低（p<0.01）。见表1和图1-1、图1-2。
3.2 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响
结果显示：裴氏升血颗粒各剂量组小鼠脾淋巴细胞增殖活性均较模型组升高，其中大剂量组A₄₉₀值为0.102，较模型组明显升高（p<0.05）。与正常组比较：模型组小鼠脾淋巴细胞增殖活性明显降低（p<0.05）。见表2和图2。
表1 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响（n=10，x̄±S）
| 组别 | 剂量（g·kg⁻¹） | TI（mg/10g） | TI增长率（%） | SI（mg/10g） | SI增长率（%） |
|---|---|---|---|---|---|
| 正常对照组 | — | 21.8±2.7 | — | 83.4±3.2 | — |
| 模型对照组 | — | 13.9±3.9 | — | 64.7±11.4 | — |
| 裴氏升血颗粒组 | 2.5 | 14.6±6.1 | 5.0 | 72.4±10.6 | 11.9 |
| 5.0 | 18.0±4.3 | 29.5 | 74.2±12.9 | 14.7 | |
| 10.0 | 18.9±3.7 | 36.0 | 76.3±11.4 | 17.9 | |
| 贞芪扶正颗粒对照组 | 1.67 | 19.2±4.4 | 38.1 | 76.8±14.3 | 18.7 |
注：*p<0.05与模型组比较；▲p<0.05与正常组比较
图1-1 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠胸腺指数的影响（n=10，x̄±S）
（*p<0.05，与模型对照组相比较；▲p<0.05与正常组比较）
图1-2 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠脾脏指数的影响（n=10，x̄±S）
（*p<0.05，与模型对照组相比较；▲p<0.05与正常组比较）
表2 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响（n=8，x̄±S）
| 组别 | 剂量（g·kg⁻¹） | 脾淋巴细胞增殖活性（A₄₉₀） |
|---|---|---|
| 正常对照组 | — | 0.113±0.05 |
| 模型对照组 | — | 0.046±0.03 |
| 裴氏升血颗粒组 | 2.5 | 0.069±0.05 |
| 5.0 | 0.096±0.05 | |
| 10.0 | 0.102±0.05 | |
| 贞芪扶正颗粒对照组 | 1.67 | 0.101±0.07 |
注：*p<0.05与模型组比较；▲p<0.05与正常组比较
图2 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响（n=8，x̄±S）
（*p<0.05，与模型对照组相比较；▲p<0.05与正常组比较）
3.3 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠脾细胞上清液中IL-2浓度的影响
结果显示：裴氏升血颗粒各剂量组小鼠脾细胞培养上清液中IL-2的浓度均高于模型组，其中大剂量组IL-2的浓度为61.6pg/ml，明显高于模型组（p<0.05）。模型组小鼠脾细胞上清液中IL-2的浓度较正常组明显降低（p<0.01）。见表3和图3。
表3 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠脾细胞上清液中IL-2浓度的影响（n=6，x̄±S）
| 组别 | 剂量（g·kg⁻¹） | IL-2浓度（pg·ml⁻¹） |
|---|---|---|
| 正常组 | — | 67.0±13.5 |
| 模型组 | — | 42.6±15.0* |
| 裴氏升血颗粒组 | 2.5 | 49.3±13.0 |
| 5.0 | 55.6±14.3 | |
| 10.0 | 61.6±11.1 | |
| 贞芪扶正颗粒对照组 | 1.67 | 59.7±11.0* |
注：*p<0.05与模型组比较；▲p<0.05与正常组比较
图3 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠脾细胞上清液中IL-2浓度的影响（n=6，x̄±S）
（*p<0.05，与模型对照组相比较；▲p<0.05与正常组比较）
3.4 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFN-γ mRNA转录水平的影响
电泳图显示，内标β-actin的mRNA表达恒定，各条带量度一致；裴氏升血颗粒各剂量组IL-2和IFN-γ mRNA的条带均较模型组亮，其中大、中剂量组小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFN-γ mRNA的条带亮度明显增高。见图4-2、4-3。
各标本mRNA条带的光密度参数与内参基因（β-actin）mRNA条带的光密度参数的比值结果显示：裴氏升血颗粒各剂量组小鼠脾细胞IL-2和IFN-γ mRNA的表达均高于模型组，其中大剂量、中剂量组小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFN-γ mRNA的表达明显增高（p<0.05）。与正常组比较，模型组小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFN-γ mRNA的表达明显降低（p<0.01）。见表4及图4-1。
裴正学系列方药的研究
表4 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠IL-2、IFN-γ mRNA表达的影响（n=6，x̄±S）
| 组别 | 剂量（g·kg⁻¹） | IL-2/β-actin | IFN-γ/β-actin |
|---|---|---|---|
| 正常对照组 | — | 0.442±0.072 | 0.584±0.077 |
| 模型对照组 | — | 0.168±0.036 | 0.216±0.060 |
| 裴氏升血颗粒组 | 2.5 | 0.207±0.025 | 0.285±0.070 |
| 5.0 | 0.245±0.041 | 0.356±0.069 | |
| 10.0 | 0.264±0.040 | 0.383±0.062 | |
| 贞芪扶正颗粒对照组 | 1.67 | 0.262±0.044 | 0.380±0.078 |
注：与正常组比较，*p<0.05，**p<0.01
图4-1 裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠脾淋巴细胞IL-2、IFN-γ mRNA表达的影响（n=6，x̄±S） （*p<0.05，与模型对照组相比较；▲p<0.05与正常组比较）
图4-2 IL-2电泳图 1.正常组，2.模型组，3.小剂量组，4.中剂量组，5.大剂量组，6.贞芪组
图4-3 IFN-γ电泳图 1.正常组，2.模型组，3.小剂量组，4.中剂量组，5.大剂量组，6.贞芪组
讨论
裴氏升血颗粒主要由六味地黄汤合生脉散加太子参、北沙参、党参等组成，均属扶正固本之品。方中重用太子参、党参、北沙参以健脾；六味地黄汤以补肾，全方充分体现了中医之"扶正固本"法则。
祖国医学在人类发病学方面，以"正气内虚"为致病之本，《素问遗篇·刺法论》说："正气存内，邪不可干"，《素问·评热病论》说："邪之所凑，其气必虚"；在治病方面则提出了扶正固本的治疗法则。人体的"正气"亦称"真气"，《灵枢·刺节真邪篇》说："真气者所受于天，与谷气并而充其身也"。真气包含着先天与后天两个方面，历代医家把先天方面归于两肾，名曰"元气"；把后天方面归于脾胃，名曰"中气"（谷气）。脾主中气，肾主元气，因此在"扶正固本"法则中，"健脾"与"补肾"便是最重要的两端。实验研究证明，中医的"脾"、"肾"具有免疫系统、内分泌系统、代谢系统、植物神经系统、胃肠胰内分泌系统等诸方面的意义，"健脾补肾"具有改善上述各方面功能的作用。"扶正固本"这一旨在发挥和动员人体抗病能力的观点和现代免疫学之间存在着很大的共同性。中医所称的"正气"，总的来说，代表着机体内在的抗病能力，这种能力相当于人体免疫系统的生理功能。机体免疫系统有非特异性免疫和特异性免疫两类。中医的中气、卫气与现代免疫学的非特异性免疫有相似之处，而元气则与特异性免疫有相似之处；特异性免疫和非特异性免疫相互促进共同完成机体的免疫效应，中气和元气亦相互促进共同形成机体的正气作用；"扶正固本"则能提高机体免疫功能。随着免疫学和分子生物学的发展，研究证实，恶性肿瘤的发生、发展与机体的免疫功能低下密切相关。在肿瘤治疗中，局部肿瘤的彻底根除（手术）、放疗、化疗等常常并不能令患者更加受益，患者常因免疫功能严重受创，出现远处播散、转移，使生活质量、生存期大打折扣。免疫功能在肿瘤发生、发展、转移、逆转、消退中占有的地位日益受到重视。
我国著名中西医结合专家、导师裴正学教授，结合自己40多年的临床经验，认为：正虚是恶性肿瘤发生、发展的根本原因；扶正固本是治疗恶性肿瘤的基本法则，在应用这一法则时以"健脾补肾"为其精髓；由此拟定"兰州方"，经30余年的不断实践、充实、重组，最后制成"裴氏升血颗粒"，其组成主要有：六味地黄汤、生脉散、北沙参、党参、太子参、桂枝、大枣、五味子、炙甘草、白芍等。周晓棉等研究证明六味地黄软胶囊可改善环磷酰胺致成年及幼年小鼠免疫功能低下状态，表现在改善T细胞增殖能力，提高T细胞数量，尤其是CD8阳性细胞，明显提高脾细胞天然杀伤活性，能明显降低迟发型超敏反应，能增强机体的防御功能。赵长青、王禾等实验证明，六味地黄软胶囊具有一定的抗肿瘤、延缓衰老作用，同时认为对机体免疫机能的增强可能是其抗肿瘤、抗衰老的机制之一。有研究证明西洋参多糖对小鼠T淋巴细胞钙依赖性钾通道有影响，通过膜片钳技术记录T淋巴细胞钙依赖钾通道电流，发现西洋参多糖可使ConA激活的T淋巴细胞钙依赖性钾通道开放概率增加、开放时间延长、关闭时间缩短，单独不能激活通道。研究发现麦冬多糖可增加小鼠胸腺、脾脏重量，促进巨噬细胞的吞噬作用，对由
裴正学系列方药的研究
环磷酰胺引起的白细胞数下降有极显著的对抗作用；它对Co照射引起的白细胞数下降有明显拮抗作用，并能增加血红细胞凝集率，对机体免疫各个环节均有明显的促进作用，从而增强体液免疫能力和提高机体适应性。赵国华等[38]报道，山药多糖150mg/kg对Lewis肺癌和B16黑色素瘤有最佳的抑制作用。
胸腺是重要的中枢免疫器官之一，是T细胞分化成熟的场所，在机体的免疫调节中发挥重要的作用；脾脏是重要的外周免疫器官之一，是各类免疫细胞居住和产生免疫应答的场所，也是合成免疫活性物质（如干扰素、补体、细胞因子等）的重要场所。因此，观察胸腺和脾脏的改变，可以评价机体的免疫状态。本实验中，荷瘤模型组小鼠胸腺、脾脏体积缩小，重量减轻，个别胸腺分叶不清，呈灰白色，脾脏色变淡红色。而裴氏升血颗粒各剂量组小鼠的胸腺、脾脏的外观与正常组无明显差异。裴氏升血颗粒大、中、小剂量组小鼠胸腺指数、脾脏指数均高于模型组，其中大剂量组小鼠胸腺指数、脾脏指数分别为18.9mg/10g、76.3mg/10g，较模型组分别增长36.0%、17.9%（p<0.05）；中剂量组小鼠胸腺指数18.0mg/10g，较模型组增长29.5%；与正常组比较：模型组小鼠胸腺指数、脾脏指数明显降低（p<0.01），裴氏升血颗粒大剂量组小鼠胸腺指数、脾脏指数均接近正常组（p>0.05）。提示，裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠免疫器官胸腺、脾脏有明显增重作用，表明裴氏升血颗粒能增强荷瘤小鼠非特异性免疫功能。
淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要细胞群体，可分为T细胞、B细胞、NK细胞等群体。脾脏是较大的淋巴器官，脾脏中主要是T淋巴细胞和B淋巴细胞。ConA刺激的脾淋巴细胞增殖能力是反映体内淋巴细胞功能的重要标志。本实验显示：裴氏升血颗粒组小鼠脾淋巴细胞增殖活性均高于模型组，以大剂量组作用最优（p<0.05）。表明：裴氏升血颗粒可促进ConA刺激的脾淋巴细胞增殖能力，增强荷瘤小鼠机体的细胞免疫功能，从而提高抗肿瘤效应。
在机体的免疫系统中，免疫细胞之间、免疫分子之间、免疫细胞与免疫分子之间相互影响，彼此调节，构成了精细复杂的调节网络，共同维持机体的免疫平衡和自身稳定。IL-2-IFN-γ-NKC免疫调节网络当数重要网络之一，并与MΦ-IL-1-Th1免疫调节网络密切相关。而细胞因子可以直接或间接地影响到抗原提呈、淋巴细胞对抗原的识别、淋巴细胞的分化和成熟及抗体产生等多种过程，发挥重要的免疫调节作用。IL-2和IFN-γ是细胞因子网络中重要的调节因子，在抑制肿瘤细胞生长及免疫调节方面发挥着重要的作用。IL-2和IFN-γ等细胞因子表达的变化常被作为评价免疫功能的一个重要方面。本研究结果显示：裴氏升血颗粒各剂量组小鼠脾细胞培养上清液中IL-2的浓度均高于模型组，其中大剂量组IL-2的浓度为61.6pg/ml，明显高于模型组（p<0.05）；裴氏升血颗粒各剂量组小鼠脾细胞IL-2和IFN-γ mRNA的表达均高于模型组，其中大剂量、中剂量组小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFN-γ mRNA的表达明显增高（p<0.05）。提示：裴氏升血颗粒能够促进IL-2的分泌以及IL-2 mRNA和IFN-γ mRNA的表达，通过对细胞因子的影响调节机体的免疫功能，这也是裴氏升血颗粒抗肿瘤的途径之一。
结语
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