中文摘要

中文摘要

目的： 通过观察裴氏升血颗粒（PG）对肿瘤细胞凋亡和突变型P53、Caspase-3蛋白表达的影响，并分析其作用机理，为该药的抑瘤作用提供科学依据。

方法： 采用荷H22（肝癌）实体瘤小鼠模型，观察PG对H22小鼠肿瘤的抑制作用，用免疫组化法测定PG对H22肿瘤细胞P53表达的影响，用流式细胞术检测PG对H22肿瘤细胞Caspase-3蛋白表达的影响。

结果： PG大、中、小剂量组对荷瘤小鼠肿瘤H22的抑制作用均高于模型组，PG低剂量组抑制率为29.3%，与模型组比较差异显著（P<0.05）。PG中、高剂量组抑制率分别为35.9%和36.8%，与模型组比较差异非常显著（P<0.01）。对小鼠肿瘤病理组织切片观察显示，PG可促使H22模型小鼠肿瘤组织坏死。PG各剂量组荷瘤小鼠胸腺指数、脾脏指数均高于模型组，其中大剂量组TI、SI分别为36.0mg/10g、64.4mg/10g，较模型组分别增长29.0%、20.4%（P<0.01）；中剂量组TI为35.2mg/10g，较模型组增长26.2%（P<0.05）。PG各剂量组荷瘤小鼠肿瘤细胞中突变型P53的表达均低于模型组，以中、大剂量组作用最优；其突变型P53平均阳性细胞数分别为54.25、55.38，与模型组比较有显著性差异（P<0.05）。PG各剂量组小鼠肿瘤细胞中Caspase-3的蛋白表达均较模型组增高，其中大、中剂量组与模型组比较有显著性差异（P<0.01）。

结论： 本实验表明：PG对小鼠H22肿瘤的生长具有显著抑制作用，对小鼠肿瘤病理组织切片观察显示，PG可促使H22模型小鼠肿瘤组织坏死。PG对荷H22瘤小鼠免疫器官胸腺、脾脏具有增重作用。PG具有诱导肝癌细胞凋亡的作用，PG作用于肿瘤细胞后能明显下调P53（Mt）和促进Caspase-3的表达。提示PG抗肿瘤作用的机理之一可能是通过抑制突变型P53和上调Caspase-3蛋白的表达实现的。PG在肿瘤治疗中可能具有广阔的应用前景。

关键词： 裴氏升血颗粒，H22（肝癌），细胞凋亡，突变型p53，Caspase-3

裴正学系列方药的研究

ABSTRACT

Objective: To provide scientific evidence of PG on tumor cell inhibiting through observing the effects of PG on tumor cell apoptosis, the effects on Mild type P53, caspase-3 protein expression and analyzing its effect and theories.

Methods: The models of solid tumor were developed by hepatoma cell H22 transplantation in mice. Experiment parameters were obtained by observing PG's inhibiting on hepatoma cell H22, assessing effects of PG on cell H22 P53's expression by immune histochemistry method; checking the effects of PG on cell H22's caspase-3 protein expression by Flow cytometry method.

Results: PG had remarkable restrain effect on tumor growth in H22 tumor-bearing model mice. The inhibitory effect of each group was higher than the model group. The restrain effect of low group was 29.3%, it has remarkable difference than the control group (p<0.05). The restrain effect of medium and high group was 35.9% and 35.9%, it has remarkable difference than the control group (p<0.01). The TI and SI was increased in PG groups. In high dose group they were significantly increased (p<0.01), and rose by 29.0% and 20.4% respectively; The TI in medium dose group was 18.0mg/10g, and rose by 26.2% (p<0.05). The express of Mild type p53 in every group of PG was lower than control group, and the medium group and the high group was very obvious, they number positive cell was 54.25 and 55.38, it has remarkable difference than the control group (p<0.05). The caspase-3 protein expression in each group of PG was increased than control group, the medium group and the high group has remarkable difference than the control group (p<0.05).

Conclusion: PG had remarkable restrain effect on tumor growth in H22 tumor-bearing model mice. PG make H22 tumor organize rotten. PG has the function of weightening the immune organs (the thymus, the spleen), PG has the effect of make H22 cell death, PG make Mild type p53 descend and impel the expression of caspase-3 protein.

Keywords: Peishishengxue Granule (PG), H22, apoptosis, Mild type p53, caspase-3

前言

裴氏升血颗粒是导师裴正学教授、全国著名中西医结合专家集四十余年的临床经验，根据扶正固本的理论严密组方，拟定的治疗白血病专方。裴教授在继承中医整体观的基础上，采用扶正固本之大法，拟定多种中药处方配合化疗治疗白血病，师古而不泥于古，发展又有创新，所拟定之中药处方——"兰州方"在临床上取得了显著疗效。"兰州方"因其在三十年前完全彻底治愈了急性单核细胞性白血病（M5）患者马长生，在1974年苏州全国血液病会议上被定名为"兰州方"。2003年，裴氏升血颗粒又成功治愈了一例白血病患者（L2）刘力刚，先后在80年代……

裴正学系列方药的研究

《南昌日报》及《甘肃日报》进行报道。裴教授用此方除了治疗白血病之外，还用其治疗多种癌症及其难治性贫血，曾在食管癌、胃癌、骨髓增生异常综合征、再障等方面取得过显著疗效。[3][4]1997年该方作为甘肃省医学科学研究院院内制剂，命名"裴氏升血颗粒"。该药剂之部分实验研究已通过了成果鉴定。曾获得甘肃省皇甫谧科技成果一等奖。鉴于裴氏升血颗粒具有显著的临床疗效，截至目前已为省内外数万名患者进行了治疗，其临床疗效得到了临床医生和广大患者的认可，在省内外享有一定的知名度。

根据粗略回忆，该方完全治愈食道癌2例、恶性淋巴瘤3例、再生障碍性贫血3例、小肝癌2例[4]。其中对食道癌、肝癌、恶性淋巴瘤、再生障碍性贫血等病之疗效显著，薛氏[5]运用"兰州方"治疗原发性肝癌，使患者肿块明显缩小，肝功能完全恢复，提高了患者的生活质量，延长了患者的生存期；李氏等[6]运用兰州方配合化疗治疗癌症10例疗效观察显示：近期疗效兰州方组优于单纯化疗组（p<0.05）；从毒副反应看，兰州方组明显轻于单纯化疗组（p<0.01）。裴氏升血颗粒与核素并用治疗肝癌15例，治疗组用核素加服裴氏升血颗粒（PG），对照组仅用核素，发现治疗组毒副作用明显轻于对照组，二者之疗效对比亦有显著性差异[7]。

通过动物实验研究证明：裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠免疫器官胸腺、脾脏有明显增重作用，从而增强荷瘤小鼠非特异性免疫功能。可促进ConA刺激的脾淋巴细胞增殖能力，增强荷瘤小鼠机体的细胞免疫功能，提高抗肿瘤效应。能够促进IL-2的分泌以及IL-2和IFN-γ mRNA的表达，提示裴氏升血颗粒可以通过对细胞因子的影响调节机体的免疫功能。[8]裴氏升血颗粒能调节机体紊乱的免疫状态，可使荷瘤小鼠迟发过敏反应增强，增加荷瘤小鼠的细胞免疫功能。增强腹腔巨噬细胞吞噬功能、IL-1、IFN-γ、NO等细胞因子呈增高趋势；裴氏升血颗粒对荷H22瘤小鼠肿瘤有明显抑制作用。增强免疫功能是裴氏升血颗粒抗肿瘤的重要作用机制[9]。裴氏升血颗粒可明显升高再障模型小鼠（经3.0GY直线加速器全身照射所建立）的外周血红蛋白、白细胞、血小板值，能明显恢复再障模型小鼠骨髓的造血功能[10]。小鼠脾脏病理组织切片观察显示，裴氏升血颗粒可减轻再障模型小鼠脾脏病理学改变，降低淋巴细胞的凋亡率，促进生发中心的恢复，使白髓面积扩大，被膜变薄，扩张的血窦基本恢复正常。免疫组化法检测脾脏CD4、CD8含量结果表明，裴氏升血颗粒可使再障模型小鼠脾脏CD4含量呈增高趋势、CD8含量呈降低趋势，增高CD4/CD8值，从而提高再障模型小鼠的免疫功能[11]。延长生存期，减慢肿瘤生长速度，与多年来裴氏升血颗粒在临床应用中所取得的疗效一致。尽管上述同道对裴氏升血颗粒的研究和开发作出了一定的努力，但是对这一临床具有大家公认的显著疗效的方药的微观探讨仍嫌不足，鉴于此我们在上述研究的基础上采用小鼠H22实体瘤模型，研究裴氏升血颗粒的抗肿瘤作用及相关机制，通过观察不同剂量的PG对小鼠H22瘤体生长的情况，确定其抗肿瘤效果。从诱导肿瘤细胞凋亡角度研究PG的抗肿瘤机制，从蛋白、基因水平观察该药对H22肿瘤细胞p53和Caspase-3的蛋白表达情况，从分子水平探讨裴氏升血颗粒的抗肿瘤诱导肿瘤细胞凋亡机理。为该药在治疗恶性肿瘤方面的应用，以及为中医和中西医结合治疗肿瘤提供科学依据，为裴氏升血颗粒临床广泛应用提供科学、微观的依据。

---

实验研究