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裴正学系列方药的研究

摘要

目的： 探讨裴氏生血颗粒（PG）对H₂₂荷瘤小鼠免疫系统的调节作用及其对肿瘤组织的抑制作用。

方法： 通过小鼠右前腋下皮下接种，建立H₂₂荷瘤小鼠模型，观察PG对小鼠肿瘤的抑制效应，采用ELISA法检测EGF浓度，RIA法检测IL-1浓度。

结果：

1. PG各组肿瘤抑制率均高于模型组，中剂量组尤为显著（P<0.05）；
2. PG各组胸腺指数（TI）和脾指数（SI）均升高，中、高剂量组显著升高（P<0.05），中剂量组SI显著升高（P<0.05）；
3. PG各组EGF浓度低于模型组，中剂量组差异显著（P<0.05）；
4. PG各组IL-1浓度低于模型组，中、高剂量组差异显著（P<0.05）。

结论： PG通过增加H₂₂荷瘤小鼠胸腺和脾脏重量、抑制EGF形成及IL-1分泌而发挥抗肿瘤作用。

关键词： 裴氏生血颗粒（PG）；H₂₂（移植性肝癌）；IL-1；EGF；免疫功能

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前言

原发性肝癌（PLC）为常见的消化道恶性肿瘤，是全世界最常见的恶性肿瘤之一，发病迅猛，病情凶险，预后不佳，已成为威胁人类健康的一大杀手。全世界每年新发现恶性肿瘤病人约635万例，据世界卫生组织（WHO）的报告，预期到2020年每年新发病例数将达到1500万。其中肝癌占26万例（占恶性肿瘤的4%），我国肝癌发病人数约占全球的55%，在肿瘤相关死亡中位居第二，被《中国癌症预防与控制规划纲要》列为我国癌症防治重点疾病。

目前治疗肝癌，早期以手术切除为主，加放、化疗。但从现有的资料来看：手术切除率不高，切除后的复发率高；肝癌属于放、化疗不敏感肿瘤，且易转移。因大多数患者当发现已届晚期，从而失去手术机会。医学界在寻求和使用抗癌药物的同时，发现许多化学抗癌药物在作用于靶细胞时往往累及正常细胞，且临床上用于治疗肿瘤的化学药物大多数品种都有不同程度的致突变遗传毒性，为此治疗肿瘤的同时增加了病人患第二种肿瘤的可能性；但植物药的遗传毒性似乎不太明显。

祖国医学认为人类发病学方面，以"正气内虚"为致病之本。《素问·遗篇刺法论》曰："正气存内，邪不可干"；《素问·评热病论》曰："邪之所凑，其气必虚"，在治病方面则提出了扶正固本的治疗大法。人体的"正气"亦称"真气"，《灵枢·刺节真邪篇》云："真气者，所受于天，与谷气并而充身也"。真气包含先天与后天两方面因素，历代医家把先天方面归于两肾，名曰"元气"（元气）；把后天方面归于脾胃，名曰"中气"（谷气）。"脾为后天之本，气血生化之源"，主中气；"肾为先天之本，藏髓生精"，主元气。后天脾土的运化，须赖先天肾阳之温煦；先天真阳之升……

裴正学系列方药的研究

发，须赖后天脾土之濡养，脾、肾相辅相成，共同维持着人体机能的生长。因此在"扶正固本"法则中，"健脾"与"补肾"便是最重要的两端。实验研究证明，中医的"脾"、"肾"具有免疫系统、内分泌系统、代谢系统、植物神经系统、胃肠胰内分泌系统等诸方面的意义，"健脾补肾"具有改善上述各方面功能的作用，为扶正固本大法之精髓。"扶正固本"这一旨在发挥和动员人体抗病能力的观点和现代免疫学之间存在着很大的共同性[6-14]。中医所称的"正气"，总的来说，代表着机体内在的抗病能力，这种能力相当于人体免疫系统的生理功能。机体免疫系统有非特异性免疫和特异性免疫两类。中医的中气、卫气与现代免疫学的非特异性免疫有相似之处，而元气则与特异性免疫有相似之处；特异性免疫和非特异性免疫相互促进共同完成机体的免疫效应，中气和元气亦相互促进共同形成机体的正气作用；"扶正固本"则能提高机体免疫功能。随着免疫学和分子生物学的发展，研究证实，恶性肿瘤的发生、发展与机体的免疫功能低下密切相关。在肿瘤的治疗中，患者往往不能因局部肿瘤的彻底根除（手术）、放疗、化疗等而得到根治，有时可因免疫功能之严重受创，出现远处播散、转移，使生活质量、生存期受到影响。

导师裴正学教授，结合自己四十多年的临床经验，认为"正虚"是恶性肿瘤发生、发展的根本原因，扶正固本是治疗恶性肿瘤的基本法则，在应用这一法则时以"健脾益肾"为其精髓，由此而拟定了"兰州方"，经不断实践、充实、重组，最后制成"裴氏升血颗粒"（由生地、山萸肉、山药、太子参、北沙参、潞党参、桂枝、五味子、白芍、浮小麦等组成）。多年的临床应用，证明该颗粒对各种恶性肿瘤的治疗，防治肿瘤复发、转移，改善患者因放、化疗引起的免疫功能低下，提高患者生活质量，延长生存时间等有很好的改善作用。本实验力图科学客观地研究说明裴氏升血颗粒的抗肿瘤效果及机制，为其在临床中的广泛应用提供充分的科学理论依据。

一、立题依据

裴氏升血颗粒是我国著名中西医结合专家、导师裴正学教授在拟定的治疗白血病专方——"兰州方"的基础上，经不断实践、充实、重组而研制的制剂。主要由生地、山萸肉、山药、太子参、北沙参、潞党参、桂枝、五味子、白芍、浮小麦等组成，重用太子参、潞党参、北沙参以健脾；六味地黄汤的核心药物以补肾[16,17]。该方三十年前因完全治愈了急性单核细胞性白血病（M）患者马长生，1974年在苏州召开的血液病会议上被定名为"兰州方"。2003年，裴氏升血颗粒成功治愈了又一例白血病患者（L₂）刘力刚，先后在《南昌日报》及《甘肃日报》进行报道。1997年该方作为甘肃省医学科学研究院院内制剂，定名"裴氏升血颗粒"。该药剂于2002年起作为甘肃省医科院临床科研课题进行实验研究，通过了成果鉴定。曾获得2003年甘肃省皇甫谧科技成果一等奖。

30多年的临床应用，证明裴氏升血颗粒（即"兰州方"）不仅对白血病有很好的疗效，对恶性肿瘤，以及放、化疗引起的免疫功能低下等有很好的改善作用。临床实践证明该方对食道癌、肝癌、恶性淋巴瘤、再生障碍性贫血等疾病均有显著疗效。据随师侍诊期间不完全统计，完全治愈食道癌2例、恶性淋巴瘤3例、再生障碍性贫血5例、小肝癌2例[18]。薛氏[19]运用"兰州方"治疗原发性肝癌，使患者肿块明显缩小，肝功能完全恢复，提高了患者的生活质量，延长了患者的生存期；李氏等[20]用兰州方配合化疗治疗癌症10例疗效观察显示：近期疗效兰州方组优于单纯化疗组（p<0.05）；从毒副反应观察兰州方组明显轻于单纯化疗组（p<0.01）。裴氏升血颗粒与核素并用治疗肝癌15例，治疗组用核素加服PG，对照组仅用核素，发现治疗组毒副作用明显小于对照组，二者之疗效对比亦有显著性差异[21]。

近年来，大量的动物实验研究证明[22-25]：裴氏升血颗粒可明显升高再障模型小鼠（经3.0GY直线加速器全身照射所建立）的外周血红蛋白、白细胞、血小板值，能明显恢复再障模型小鼠骨髓的造血功能；显著抑制Mtp53以及提高Caspase-3的蛋白表达，诱导肿瘤细胞凋亡；抑制NF-κB表达，影响基因转录功能，阻滞肿瘤细胞G₁期向S期的进程，使细胞增生能力下降；促进ConA刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖能力，促进IL-2的分泌以及IFN-γ mRNA的表达，增强荷瘤小鼠的细胞免疫功能。裴氏升血颗粒以扶正固本为大法，注重对机体的整体调节，使机体之免疫低下状态得到不同程度的改善，从而达到临床疗效。中医这一"扶正固本"之法，与现代医学之免疫学、分子生物学、基因组学等有着异曲同工之处[10]。前几届研究生在这方面虽然已做了一些工作，但是还有许多方面需要我们进一步去探讨。

EGF是一种强有力的细胞分裂促进因子，与肿瘤发生有密切关系[26,27]。肝细胞是EGF作用的一个主要靶细胞，体外研究表明，EGF能促进肝癌细胞的生长。表皮生长因子受体（EGFR）可以促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移，抑制肿瘤细胞凋亡[28]。EGF与EGFR结合后，可通过离子通道、信号传导及基因表达等机制促进肝癌细胞DNA合成，促进肝癌发生与发展[29]。

IL-1是体内作用最强的炎症介质之一，IL-1β（interleukin-1β，IL-1β）是IL-1家族的重要成员之一，在正常机体中的表达水平极低。近年来发现，许多肿瘤细胞中IL-1β的表达水平异常升高，在肿瘤的生长、局部浸润、转移及肿瘤血管生成中发挥着重要作用[30,31]。

本实验通过建立荷H₂₂瘤小鼠模型观察裴氏升血颗粒对小鼠血清EGF和IL-1的影响情况，从细胞因子方面探讨裴氏升血颗粒的抗肿瘤效果及中草药的抗肿瘤机制，为其在临床中的广泛应用提供充分的科学理论依据，并为该制剂开发成高效防治肿瘤的新型中药制剂而奠定基础。

二、实验研究