中文摘要

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目的： 通过观察裴氏软肝消痞丸(PRGXP)对小鼠移植性肝癌H22瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)及P53表达的影响，探讨裴氏软肝消痞丸治疗原发性肝癌的作用机制，为裴氏软肝消痞丸在临床上广泛应用提供理论依据。

方法： 通过小鼠右前腋部皮下接种法，建立荷H22（肝癌）实体瘤小鼠模型，随机平均分为空白组、模型组、软肝消痞丸大剂量组、软肝消痞丸中剂量组、软肝消痞丸小剂量组和复方斑蝥胶囊组。灌胃给药10d后，脊髓脱臼法处死，剥离肿瘤、胸腺、脾脏并称重，计算抑瘤率，测定胸腺指数(TI)及脾脏指数(SI)。采用免疫组织化学方法测定小鼠移植性肝癌H22瘤组织中VEGF及突变型P53蛋白的含量。

结果：

1. 裴氏软肝消痞丸大、中、小剂量组的平均瘤重均低于模型组，分别为（0.926±0.237）g、（0.776±0.122）g、（0.935±0.227）g，与模型组比较均有统计学意义（p<0.05），其抑瘤率分别为24.5%、36.8%和23.9%；
2. 裴氏软肝消痞丸大、中、小剂量组荷瘤小鼠的胸腺指数(TI)、脾脏指数(SI)均高于模型组，其中中剂量组TI为（53.2±15.6）mg/10g，较模型组增长31.4%，与模型组比较有统计学意义（p<0.05）；裴氏软肝消痞丸大、中、小剂量组SI分别为（55.2±15.9）mg/10g、（65.0±10.1）mg/10g、（58.9±14.5）mg/10g，较模型组分别增长23.2%、45.1%、34.5%，与模型组比较有统计学意义（p<0.05）；
3. 裴氏软肝消痞丸大、中、小剂量组VEGF的阳性表达平均光密度值（MOD）较模型组减少，分别为0.3±0.008、0.287±0.014、0.298±0.007，与模型组比较均有统计学意义（p<0.05）；
4. 裴氏软肝消痞丸大、中、小剂量组突变型P53的阳性表达MOD值均较模型组减少，分别为0.266±0.005、0.260±0.007、0.263±0.008，与模型组比较均有统计学意义（p<0.05）。

结论： 裴氏软肝消痞丸可提高荷H22肝癌小鼠的胸腺指数、脾脏指数，抑制VEGF的生成和突变型P53的表达，从而起到抗肿瘤的作用。

关键词： 裴氏软肝消痞丸；H22（肝癌）；血管内皮生长因子；P53

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裴正学系列方药的研究

ABSTRACT

Objective: Through observing the effect of Peishiruanganxiaopi pills (PRGXP) on the vascular endothelial growth factor (VEGF) and P53 (P53) in H22 tumor bearing mice, we aim to explore the basic mechanism of PRGXP's effect on primary carcinoma of the liver, in order to support for its clinical use.

Methods: Firstly, through the subcutaneous inoculation of mice right anterior axillary and mice were injected H22 tumor cells, then they were divided into 6 groups: the normal group, model group, the PRGXP high-dose group, PRGXP medium-dose group, PRGXP low-dose group and compound cantharis capsule group. After ten days that they were fed, all mice were killed. Those tumors, thymuses and spleens were peeled off and weighted. The antitumor rate, the thymus index (TI) and the spleen index (SI) were calculated. The expression of VEGF and p53 protein in the tumor tissue was studied by immunohistochemistry, and we analyzed the statistics.

Results:

1. The inhibition rate of the tumor was higher in PRGXP groups than that in model group especially when it was remarkably higher in medium dose group. The average tumor in high dose group is (0.926±0.237)g and in medium dose group is (0.776±0.122)g and in lower dose group is (0.935±0.227)g (p<0.05);
2. The TI and SI were increased in PRGXP groups. In medium, the TI was (53.2±15.6)mg/10g which was significantly increased (p<0.05), and rose by 31.4% respectively. The SI in high-dose group, medium-dose group and low-dose group were (55.2±15.9)mg/10g, (65.0±10.1)mg/10g, (58.9±14.5)mg/10g, (70.53±18.96)mg/10g, and rose by 23.2%, 45.1%, 34.5%, (p<0.05);
3. The concentration of VEGF in PRGXP groups was lower than that in model group, significantly in those groups (p<0.05), they were 0.3±0.008, 0.287±0.014, 0.298±0.007;
4. The concentration of p53 in PRGXP groups was lower than that in model group, significantly in those groups (p<0.05), they were 0.266±0.005, 0.260±0.007, 0.263±0.008.

Conclusion: PRGXP plays the role of antitumor through increasing the thymus index and the spleen index in H22 tumor-bearing mice and inhibiting the formation of VEGF and P53.

Keywords: Peishiruanganxiaopi pill; H22 (transplanted liver cancer); vascular endothelial growth factor; P53

前言

肝癌是临床上常见的消化道恶性肿瘤，被世界卫生组织列为十大恶性肿瘤之一。其发病率在全球范围内有逐年增长趋势，目前已超过62.6万/年，居恶性肿瘤的第五位；死亡接近228

裴正学系列方药的研究

60万/年，居肿瘤相关死亡的第三位。我国是肝癌高发区，发病人数约占全球的55%，在肿瘤相关死亡中居第二位，已成为严重威胁人类健康的一大杀手。故在《中国癌症预防与控制规划纲要》中，把肝癌列为我国癌症防治重点疾病[2]。

肝癌的发病机制目前尚不太清楚，但现代研究认为与癌基因的激活和抑癌基因的失活有关。P53是迄今人类研究最深入、最广泛的抑癌基因，其与细胞的增殖、分化、凋亡、浸润和转移等密切相关。P53分为野生型P53（wt-P53）和突变型P53（mt-P53）两类。wt-P53被认为是肝癌发生过程中最为重要的一个抑癌基因，其主要生物学作用是调控细胞周期和诱导细胞凋亡、维持整个基因组和细胞的正常运行、保持机体的稳定性，抑制肿瘤的发生，故被誉为基因组的守护神。当在内外致癌因素作用下，wt-P53发生突变，转变为mt-P53。mt-P53则具有癌基因的特性，不仅失去抑制肿瘤的作用，而且有助于肿瘤血管生成表型的形成，诱导血管内皮生长因子（VEGF）的表达，促进肿瘤的生长、浸润和转移。

肝癌是一典型的多血管肿瘤，其生长需要大量新生血管作支撑，一方面向宿主获取丰富的营养，另一方面向宿主输出大量恶性细胞，从而致使肿瘤不断生长和转移，故血管生成在肿瘤发生、发展中起着重要的作用。VEGF作为恶性肿瘤细胞产生的最主要的促血管生成因子，在肝癌的发生、侵袭和转移中具有不可替代的作用。

肝癌的治疗方法有很多种，如手术、介入、放疗、全身化疗、局部治疗、生物和免疫治疗等，虽然取得了一定疗效，但不甚理想。祖国传统医药以其高效、低毒、多途径、多靶点、逆转多药耐药作用显著等优势越来越多地被世人所关注。近年来，随着分子生物学及医学免疫学的快速发展，中医药对肝癌的研究越来越深入越微观，已达到分子水平。

裴氏软肝消痞丸是我国著名中西医结合专家裴正学教授积四十余年的临床经验，创造的防治肝癌的有效方药。全方由黄芪、丹参、莪术、海藻、皂角刺、白花蛇舌草、半枝莲等药物组成，共凑健脾益气、活血化瘀、软坚散结、清热解毒之功，使扶正而不留邪，去邪而不伤正，标本兼治。经过数十年的临床检验，裴氏软肝消痞丸在减轻放化疗不良反应、延长生存时间、提高生活质量方面均已取得满意疗效。

本实验通过动物实验，观察裴氏软肝消痞丸对小鼠H22肝癌模型的作用结果，计算抑瘤率、胸腺、脾脏指数；通过免疫组织化学的方法，观察H22肝癌小鼠肿瘤组织中VEGF和p53蛋白的表达水平，探讨裴氏软肝消痞丸的抗肿瘤机制，为裴氏软肝消痞丸在临床上广泛应用提供理论依据。

立题依据