2.6.2 免疫组织化学染色 SABC法

2.6.2 免疫组织化学染色(SABC法)

PBS洗片5min/次×3。滴加3%H₂O₂室温静置孵育10min(以消除内源性过氧化物酶的活性)。

PBS洗片5min/次×3，抗原修复：将切片置于0.01M枸橼酸钠缓冲溶液(PH6.0)中，水浴锅加热至92℃95℃左右，煮沸后计时15min。自然冷却2030min后取片。

PBS(pH7.2-7.6)洗片，3min/次×3。

滴加正常山羊血清封闭液室温下封阻15min，甩去多余液体（勿洗）。

分别滴加一抗(兔抗鼠P27单克隆抗体、兔抗鼠Bcl-2单克隆抗体)，37℃静置1h左右。PBS(pH7.2-7.6)洗片，3min/次×3。

滴加生物素二抗工作液(生物素化山羊抗兔IgG)，37℃静置15min。PBS洗片，3min/次×3。

滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃孵育15min。PBS冲洗，3min/次×3。

DAB显色：使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水，加试剂盒中A、B、C试剂各一滴，混匀后加至切片。室温显色，显微镜下控制反应时间(相同指标切片显色反应时间相同，以免染色产生误差)，一般在5~30min之间。蒸馏水冲洗。

苏木精轻度复染。

自来水冲洗中止反应。

逐级脱水、二甲苯透明、中性树胶封片。

显微镜下观察组织指标表达情况。

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裴正学系列方药的研究