2.5 ELISA法检测血清IL-12浓度

2.5 ELISA法检测血清IL-12浓度

摘除小鼠眼球取血后收集于干净试管，在室温中凝固2h，离心机1500转10min后收集血清，放置在-20℃环境保存。

1. 配制标准品：设8个标准孔依次进行倍比稀释，先于各孔中均加入100μl样品稀释液，于第1孔中加100μl标准品，混匀溶解后用加样器吸出100μl，移到第2孔，混匀后吸出100μl入第3孔，如此反复至第7孔，后从第7孔吸去100μl舍去，各孔容积均是100μl，第8孔是空白组，建立标准曲线图。
2. 每孔加入待测血清100μl后将其放入37℃培养箱孵育90min。
3. 孔内加洗涤液3~5次充分洗涤后，在滤纸上拍干。
4. 备好一抗工作液50μl依次加入每孔，封板胶密封好，37℃下反应60min。
5. 孔内加洗涤液3~5次充分洗涤后，在滤纸上拍干。
6. 将酶标抗体工作液加入每孔100μl后将其放入37℃培养箱孵育60min。
7. 洗板同上。
8. 将底物工作液加入每孔100μl后将其放入37℃培养箱孵育5~10min。
9. 最后加50μl终止液终止反应。
10. 反应板放入酶标仪（450nm）测定OD值，根据OD值在坐标上找到浓度。