关键词:方药研究 / 实验研究 / 配方资产 / 转化沟通 / 1 实验材料
本章目录
1 实验材料
1.1 实验药品
裴氏升血颗粒(由生地、山药、丹皮、太子参、北沙参、党参、桂枝、大枣、五味子、炙甘草、白芍等组成,由甘肃省医学科学研究院制成颗粒冲剂,每包含生药量36.25g),贞芪扶正颗粒(由佛慈制药有限公司提供,国药准字Z62020416)。
1.2 实验动物及瘤株
健康BALB/C小鼠60只,雌雄各半,体重20±2g,5-6w龄,由甘肃省医学科学研究院实验动物中心提供,动物合格证号:医动字第04-007号。H22(肝癌)瘤株,由甘肃省医学科学研究院药理毒理研究中心提供。
1.3 实验试剂
- NaCl:北京化工厂
- Na₂HPO₄·12H₂O:天津市科密欧化学试剂开发中心
- NaOH:天津市化学试剂三厂
- KCl:天津市化学试剂五厂
- 无水乙醇:天津市博迪化工有限公司
- KH₂PO₄:北京红星化工厂
- 异丙醇:上海建信化工有限公司
- 二甲基亚砜(DMSO):天津市登峰化学试剂厂
- 甲醛:西安化学试剂厂
- 丙酮:成都化学试剂厂
- 刀豆蛋白A(ConA):北京鼎国生物技术发展中心
磷酸盐缓冲液(PBS):NaCl 8.0g,Na₂HPO₄·12H₂O 3.48g,KCl 0.20g,KH₂PO₄ 0.20g,加三蒸水至1000ml配制,调pH值至7.4,121℃高压灭菌20min,4℃保存备用
淋巴细胞分离液:天津生物技术开发中心
RPMI1640粉剂:美国Gibco公司产品。使用时,取干燥培养粉末10.4g、NaHCO₃粉末2.0g,溶于三蒸水1000ml,搅拌器搅拌至完全溶解,再用1mol/L HCl调pH值为7.2~7.4,用无菌滤器过滤除菌,分装,4℃保存备用
裴正学系列方药的研究
小牛血清:杭州四季青生物工程材料有限公司产品,56℃水浴灭活30min
溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT):Sigma公司产品。将MTT溶于PBS(pH7.4)中,配制成5mg/ml溶液,4℃避光保存
小鼠IL-2 ELISA试剂盒:北京晶美生物工程有限公司
总RNA抽提试剂盒:上海生物工程技术服务有限公司产品
RT-PCR反应试剂盒:上海生物工程技术服务有限公司产品
焦碳酸二乙酯(DEPC):美国Sigma公司产品
DNA Marker:上海生物工程技术服务有限公司
溴化乙啶(EB):上海生物工程技术服务有限公司产品
琼脂糖:华美生物工程公司产品
β-actin引物、IL-2引物、IFN-γ引物:上海生物工程技术服务有限公司合成
0.25%溴酚蓝:上海生物工程技术服务有限公司
10×TBE电泳缓冲液:Tris 108g,硼酸55g,EDTA(0.5mol/L pH8.0)40ml
1.4 实验仪器和设备
| 仪器 | 型号 | 产地 |
|---|---|---|
| 电冰箱 | 金王子 | 北京 |
| 电热干燥箱 | 202-2 | 上海 |
| 生物净化工作台 | SW-CJ-1F | 苏州 |
| 电热恒温水浴箱 | S-648 | 上海 |
| 离心机 | LD4-2A | 北京 |
| 西冷冰箱 | BY-160 | 杭州 |
| 压力锅 | BOX | 上海 |
| 倒置显微镜 | OLYMPUS PM-6 | 日本 |
| 双目生物显微镜 | OLYMPUS CHC-212 | |
| CO₂培养箱 | SHEL-LAB 1825TC | 美国 |
| 1/1000电子天平 | JA-2003 | 上海 |
| 快速混匀漩涡器 | SK-1 | 深圳 |
| 无菌操作箱 | B型-小 | 上海 |
| 隔水恒温培养箱 | PYX-DHS-50×60 | 上海 |
| 台式大容量冷冻离心机 | TDL5M | 长沙高新技术产业开发区 |
| 分光光度仪 | VIS-7220 | 北京 |
| 电泳槽 | DYCP31A型 | 北京 |
| 电泳仪 | HV-3000型 | 北京 |
| PCR扩增仪 | PE2400型 | 美国PE公司 |
| 凝胶成像分析系统 | BTS-20.M型 | Uvitec公司 |
| 微量移液器 | WKY型5-25μl | 上海 |
2 实验方法
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