总RNA的提取

总RNA的提取

① 收集细胞：收集取走上清液（IL-2）的脾细胞，300rpm，室温离心5min，彻底去上清。用PBS液调细胞浓度至5×10⁶个·ml⁻¹。

② 裂解细胞：按试剂盒说明加样，加350μl RLT Solution到样品中，剧烈振荡混匀。

③ 用匀浆器匀浆30s。

④ 加等体积的70%乙醇，用枪头混匀。

⑤ 将UNIQ-10柱放到2ml收集管中，将700μl样品加到UNIQ-10柱中，8000rpm室温离心1分钟。

⑥ 倒去收集管中的废液，将UNIQ-10柱放到同一收集管中，加500μl RW Solution到柱子中，室温下放置1分钟，10000rpm离心30s。倒去收集管中的废液，将柱子放到同一个收集管。

⑦ 加500μl稀释过的RPE Solution到UNIQ-10柱中，10000rpm，室温离心1min。倒去收集管中的废液，将柱子放到同一个收集管。

⑧ 加500μl稀释过的RPE Solution到UNIQ-10柱中，10000rpm，室温离心1min。倒去收集管中的废液，将柱子放到同一个收集管。

⑨ 10000rpm，室温离心1min，以除去残留的RPE Solution。将UNIQ-10柱放到一个无RNase污染的Eppendorf管中，吸取50μl DEPC-H₂O加到柱膜中央，50℃放置2分钟，10000rpm，室温离心1min。Eppendorf管中之液即为所提取的总RNA。