2.6 流式细胞仪检测CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞量

2.6 流式细胞仪检测CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞量

小鼠眼球取血，注入EDTA-K₂抗凝管中充分混匀，4℃冷藏20min后从每个抗凝管取小鼠全血100μL，分装于试管中，每管中分别加入Anti-Mouse CD3e PE-cy5 Conjugated、Anti-Mouse CD4 FITC、Anti-Mouse CD8 PE各5μL的单色荧光抗体，避光，室温下孵育20min后加入Optilyse C溶血素2mL混匀静置10min，1500rpm离心5min，弃上清液，PBS清洗2次，设定激发光为488nm，波长为576nm，上机检测。利用CELLQuest功能软件进行参数获取和数据分析，X轴为前向散射光，Y轴为侧向散射光，确定T淋巴细胞群，计数窗内细胞10000个，在直方图上以对数结果标记，调整确定放大倍数，并在此基础上测定淋巴细胞亚群的阳性表达率。