3 裴氏升血颗粒对细胞免疫的影响

3 裴氏升血颗粒对细胞免疫的影响

肿瘤的存在不仅抑制机体的细胞免疫功能，同时也抑制体液免疫功能，而化疗药物的应用可以加重机体的免疫抑制。因此提高肿瘤患者的免疫功能，尤其是防治化疗后出现的免疫机能的严重抑制，成为抗肿瘤治疗的一个主要方面。机体抗肿瘤反应以细胞免疫为主，细胞免疫在肿瘤的清除中起着主导作用。尤其在抗肿瘤免疫方面，细胞免疫占主导地位，其中T细胞及NK细胞作为细胞免疫的主要细胞，是机体抗肿瘤免疫的核心力量，T淋巴细胞增殖率是一个能够代表机体免疫能力的重要免疫因素。NK细胞是细胞免疫中的非特异性成分，主要发挥免疫监视功能和抗肿瘤作用，其抗瘤作用主要是机体通过非特异性免疫和特异性免疫两种途径抗肿瘤，它不仅可以抑制和杀伤肿瘤细胞，并且其抗肿瘤作用无需抗原刺激，杀伤作用不依赖抗体补体的协助，也无MHC限制性，故与特异性免疫相比，其反应时间短、生效快，作用明显。也可以通过产生IL-2、干扰素等增强其他细胞的抗肿瘤作用，在机体免疫反应中起重要作用。因此NK细胞杀伤活性也可有效地反映机体的免疫功能[38]。

动物实验证明，T细胞介导的免疫在由瘤毒、物理、化学等因素致癌排斥中，以及在正常小鼠对同种异型肿瘤的排斥中起着关键作用[39]。现已证实，T细胞介导的细胞免疫反应在杀伤肿瘤细胞、控制肿瘤生长中起重要作用，其中CD3为总T淋巴细胞，根据TCRVβCD分子的不同T细胞分两个亚群，分别表达CD4和CD8分子，两者的稳态维持着机体正常的免疫应答[40]。淋巴细胞CD4与CD8比值是反映机体免疫紊乱的敏感指标，当免疫功能受抑制时，CD4下降，CD8+上升，CD4/CD8比值减少。CD4和CD8都能识别肿瘤细胞，在许多肿瘤中CD8能通过溶细胞作用直接杀伤肿瘤细胞，因此是抗肿瘤免疫中主要效应细胞。CD4+通过多种细胞因子和酶，例如IL-2、IFN-γ、TNF-β、穿孔素、溶细胞素、丝氨酸酶和端粒酶溶解靶细胞，杀伤肿瘤细胞的效应主要是通过其释放这些细胞因子激活单核细胞和巨噬细胞及NK细胞，由单核细胞和巨噬细胞及NK细胞介导，但少数情况下，CD4+在激活CD8+中起辅助作用，激活的CD8+通过其分泌的IL-2为CD8+提供激活的第二信号。从而发现T细胞介导的细胞免疫是机

裴正学系列方药的研究

体肿瘤免疫的重要机制，而外周血T细胞亚群是反映机体细胞免疫功能的较好指标和参数。T细胞亚群的数量和功能发生异常时都可导致机体免疫功能紊乱，发生一系列的病理变化[41]。

大量文献报道，T淋巴细胞亚群的检测是评估机体细胞免疫功能状态的重要方法。T淋巴细胞在肿瘤免疫中发挥关键调控作用或直接发挥抗肿瘤效应，其中辅助性T细胞（CD4⁺）、抑制性T细胞（CD8⁺）在免疫应答调节中分别发挥正、负调节作用，CD4⁺/CD8⁺比值可直接反映机体细胞免疫功能状态[40]。

本实验中通过给予小鼠相当于临床治疗量的化疗药氟尿嘧啶（5-Fu）以建立免疫功能低下模型。实验结果表明，与单纯5-Fu组相比，裴氏升血颗粒大、中、小剂量联合5-Fu组小鼠外周血中T淋巴细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺的量均显著提高，而CD8⁺降低，说明裴氏升血颗粒可以促进淋巴细胞对有丝分裂原的反应性，促进有丝分裂，增强T淋巴细胞的数量，从而多方面促进T细胞介导的细胞免疫反应，提示裴氏升血颗粒能够从不同的环节改善细胞免疫功能，特别是在机体免疫功能低下时，免疫性T细胞数量和各亚群比例失调方面具有较明显的调节作用。

4 裴氏升血颗粒对细胞因子的影响

细胞因子是由活化的免疫细胞和一些基质细胞分泌的小分子蛋白。细胞因子本身就是一个复杂的网络，在免疫应答的启动、传播和调节中发挥着重要的免疫调控作用。很多中药都能促进细胞因子的分泌。白细胞介素（Interleukin，IL）最初是指由白细胞产生，又在白细胞间发挥作用的细胞因子，虽然后来发现白细胞介素可由其他细胞产生，也可作用于其他细胞，这一名称仍被广泛使用。目前报道的白介素有18种。白介素-2（IL-2）在体内细胞因子网络中起关键作用，对多种免疫活性细胞起促进作用，是一个在恶性肿瘤的免疫中起重要调节作用的因子。IL-2于1976年被发现，因其具有刺激T细胞生长的作用而曾被称为T细胞生长因子[41]。

IL-2主要是由活化的辅助性T细胞产生的多肽细胞因子，对T细胞、B细胞、NK细胞、巨噬细胞的功能均有上调作用。IL-2的生物活性主要是通过对各种靶细胞的作用而产生免疫增强与免疫调节作用，其对肿瘤细胞的主要生物效应有：

1. 诱导CTL（细胞毒性T细胞）活性。IL-2与其受体结合后能引起激活的T细胞克隆性增殖，从而增强CTL对肿瘤细胞的杀伤活性。
2. 诱导NK细胞活性。促进NK增殖与活化，提高NK细胞对肿瘤细胞的杀灭作用。由IL-2活化的NK细胞被称为淋巴细胞激活的杀伤细胞（LAK）。LAK具有广谱的肿瘤杀伤活性，由Rosenberg在1982年首次发现荷瘤鼠脾脏及肿瘤病人外周血的淋巴细胞经IL-2刺激、培养后对自身肿瘤细胞具有识别和杀伤活性。
3. 诱导细胞因子的分泌。IL-2能诱导外周血单核细胞分泌TNF-α对肿瘤细胞进行杀灭。
4. 促进活化的B细胞增殖、分化及提高巨噬细胞M（Φ）对肿瘤细胞的杀伤作用，并且由IL-2活化的NK细胞分泌的IFN-γ等淋巴因子又可进一步增强M（Φ）和NK细胞的抗肿瘤活性。

研究表明，癌症病人的细胞免疫功能下降，IL-2和IFN-γ调节免疫性细胞因子的产生，也相应降低。现在认为，IL-2和IFN-γ产生的降低，可能是癌症病人不能诱导NK细胞和巨噬细胞自然抗瘤活性的原因[42]。

实验通过裴氏升血颗粒联合5-Fu对荷瘤小鼠血清中IL-2的影响，其结果显示，5-Fu组IL-2含量显著降低，而联合用药组其裴氏升血颗粒中剂量+5-Fu组能够显著提高荷瘤小鼠IL-2含量，提示裴氏升血颗粒能够通过作用于IL-2增强机体的免疫功能。IL-2具有促进NK细胞增殖与活化，提高荷瘤小鼠对肿瘤细胞的杀伤作用等功能，因此IL-2含量的提高，能够间接的提高NK细胞及巨噬细胞的活性，增强机体的免疫功能。这与裴氏升血颗粒通过其他环节对NK细胞及巨噬细胞的增强作用相互促进，从而使裴氏升血颗粒增强机体免疫力的功能更加显著。

5 裴氏升血颗粒增效减毒作用相辅相成

肿瘤的发生、发展是一个多因素、多阶段的过程，因而肿瘤的治疗也相应是一个多靶点、多环节的效应过程。中药抗肿瘤除了通过提高机体的免疫功能、增加细胞毒作用、诱导肿瘤细胞分化、凋亡、逆转肿瘤耐药、影响癌基因和抑癌基因的表达等几个机制之外，还涉及中药改变肿瘤细胞的化学成分，影响肿瘤细胞的代谢，调节肿瘤细胞的信号转导，改变肿瘤细胞端粒酶活性，抑制肿瘤血管的生成，抗突变等等多种作用机制，从而达到抗肿瘤作用。化疗在肿瘤治疗过程中，可抑制肿瘤的生长，改善临床症状，但多因引起机体免疫平衡失调而降低患者生存质量。如何提高肿瘤对化疗药物的敏感性并减轻化疗药物的不良反应是目前肿瘤治疗领域中越来越引起人们重视并值得探讨的问题。增效是指在化疗期间增强肿瘤对化疗药物的敏感性并提高其治疗效果，减毒在主观上是减轻病人在化疗中的不良反应，客观上是通过实验检测技术检测化疗药物对实验指标的影响情况。但对化疗中的增效、减毒作用不能孤立地看，而要将两者有机地结合起来使之相辅相成。一方面减毒有利于增效，即在减毒作用的同时提高患者的免疫力，增强其免疫杀伤能力，有利于杀伤癌细胞。另一方面增效有利于减毒，增效可间接地降低化疗所需剂量，从而减轻或者避免不良反应的发生。说明肿瘤患者的免疫功能不仅与肿瘤的发生和发展密切相关，而且免疫功能的水平对判断肿瘤患者的治疗效果和评估疾病的预后都有重要的参考价值[43-49]。

本实验发现，荷瘤小鼠应用5-Fu后T淋巴细胞增殖活性及血清中IL-2分泌量均下降，而5-Fu联合裴氏升血颗粒治疗后，二者均有所升高，提示裴氏升血颗粒可对抗化疗药物5-Fu所致的免疫抑制，促进机体免疫功能的恢复，从而可提高机体的抗肿瘤作用。这一结果不仅支持了裴氏升血颗粒在肿瘤治疗中具有减毒增效的作用，而且其直接结果体现在抑瘤率增高，客观的说明了裴氏升血颗粒在肿瘤治疗中具有增效的作用，更进一步说明了裴氏升血颗粒增效减毒作用是相辅相成。

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结论

一是裴氏升血颗粒能够增加化疗药物5-氟脲嘧啶(5-Fu)对移植性肿瘤肝癌H22生长的抑制作用，两药合用具有相加作用。

二是裴氏升血颗粒可提高5-Fu化疗后荷H22瘤小鼠的脾脏指数及胸腺指数。

三是裴氏升血颗粒能够使5-Fu化疗后荷H22瘤小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD3、CD4的量及CD4/CD8的比值显著增加，而使CD8的量降低。

四是裴氏升血颗粒能够显著增加5-Fu化疗后荷H22瘤小鼠血清中IL-2的含量。

综上所述，裴氏升血颗粒对5-Fu化疗后荷H22瘤小鼠的免疫功能具有一定的调节作用。裴氏升血颗粒在荷瘤小鼠机体中的抑瘤作用从宏观看是通过扶正固本的整体作用，使异常的免疫抑制状态得到改善；通过微观的细胞分子学检测得出，裴氏升血颗粒可通过调节荷瘤小鼠的细胞免疫功能，从而提高自身的免疫机能以达到增效减毒作用，改善了荷瘤小鼠生存质量，疗效评价较好。

体会与展望

氟脲嘧啶(5-Fu)为大众抗癌药物中的一种，属嘧啶类抗代谢药，广泛应用于多种消化道肿瘤患者的化疗，由于具有较强的毒副作用，特别是对机体的免疫系统及胃肠道功能的损害，使其大剂量应用受限[4]。T淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要细胞群体；IL-2作为细胞因子，是活化了的T细胞产生的活性物质，在免疫与炎症反应中均有重要的作用，它可以诱导T细胞杀伤细胞，但无直接杀灭肿瘤细胞的作用，其抗肿瘤机理在于刺激、活化其效应细胞，间接发挥抗肿瘤作用。裴氏升血颗粒作为纯中药制剂，其组成药物均为扶正固本之品，从裴正学教授拟定此方剂以来，已在临床上广泛应用了40多年，证明裴氏升血颗粒不仅对白血病有很好的疗效，对恶性肿瘤，尤其对放、化疗引起的免疫功能低下具有显著的临床疗效。近年来经动物实验研究初步表明，其作用与临床应用所取得的疗效一致。

本课题的立题来源于裴正学教授四十多年来临床经验的启迪，充分体现了临床经验指导实验研究的思想，避免了实验研究的盲目性。在以后的研究中，充分利用现代科学技术新成果，深入研究裴氏升血颗粒通过调节免疫功能的物质基础及相关机理以达到增效减毒的作用，探讨裴老的中西结合学术思想以及临床的诊断思路、治疗方法，使该颗粒得到更多客观的而且微观的阐释。

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附录1 流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群的量

模型组T细胞亚群的量见图1-1、1-2

(F1 AND CD3 FL1 LOG FL2 LOG)
C 59.4% 10^4 18.5% 0.5%
MTSA 10^4
50 120 10
10^2 10^3 10^4 10^5
C 0.4% 76.7%
10^2 10^3 10^4 10^5
FL1 LOG

图1-1 图1-2

5-Fu组T细胞亚群的量见图2-1、2-2

(F1 AND CD3 FL1 LOG FL2 LOG)
C 54.6% 10^4 22.5% 20.3%
MTSA 10^4
50 120 10
10^2 10^3 10^4 10^5
C 30.9% 46 76.3%
10^2 10^3 10^4 10^5
FL1 LOG

图2-1 图2-2

裴氏升血颗粒小剂量+5-Fu组T细胞亚群的量见图3-1、3-2

(F1 AND CD3 FL1 LOG FL2 LOG)
C 69.0% 10^4 17.1% 20.2%
MTSA 10^4
50 120 10
10^2 10^3 10^4 10^5
C 32.1% 48 80.6%
10^2 10^3 10^4 10^5
FL1 LOG

图3-1 图3-2

裴氏升血颗粒中剂量+5-Fu组T细胞亚群的量见图4-1、4-2

(F4 LOG LIN)(F1 AND 34I: F1 LOG FL2 LOG)
C 71.8% 10^4 15.3% 20.2%
MTSA 50 120 0
10^2 10^3 10^4 10^5
C 31.3% 48 83.2%
10^2 10^3 10^4 10^5
FL1 LOG

图4-1 图4-2

裴氏升血颗粒大剂量+5-Fu组T细胞亚群的量见图5-1、5-2

(F1 AND CD4B FL1 LOG FL2 LOG)
C 85.6% 10^4 12.4% 20.1%
MTSA 50 120 10
10^2 10^3 10^4 10^5
C 31.5% 86.0%
10^2 10^3 10^4 10^5
FL1 LOG

图5-1 图5-2

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梁曦