中文摘要

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目的： 通过观察裴氏升血颗粒(PG)对小鼠H₂₂瘤组织VEGF表达及血清IL-12含量的影响，来探讨裴氏升血颗粒治疗肿瘤的药学机制，为该药的抗肿瘤作用提供科学依据。

方法： 建立荷H₂₂（肝癌）实体瘤小鼠模型，分为空白组、模型组、PG高剂量组、PG中剂量组、PG低剂量组和ZG组。给药10天后，计算抑瘤率，测定胸腺指数(TI)及脾脏指数(SI)。采用免疫组化法测定荷瘤小鼠瘤组织中VEGF的表达。用ELISA法测定荷瘤小鼠血清IL-12的浓度。

结果：

1. PG高、中、低剂量组对荷瘤小鼠瘤重均有明显抑制作用，其平均瘤重与模型组比较均有显著差异性(p<0.01)。PG高、中剂量组平均瘤重与PG低剂量组有显著差异性(p<0.05，或p<0.01)。PG高、中、低剂量组肿瘤抑制率分别为36.26%、37.56%、24.91%。
2. PG各剂量组荷瘤小鼠胸腺指数、脾脏指数均高于模型组。PG高、中、低剂量组小鼠胸腺指数与模型组比较有显著差异性(p<0.05，或p<0.01)。PG各剂量组小鼠脾脏指数与模型组比较有显著差异性(p<0.05，或p<0.01)。
3. PG各剂量组肿瘤组织VEGF阳性细胞数的表达，不同程度低于模型组，其中PG高、中剂量组与模型组比较有显著性差异(p<0.05)。
4. PG各剂量组荷瘤小鼠血清IL-12的浓度均较模型组增高，其中高、中剂量组与模型组比较有显著性差异(p<0.05)。

结论： 本实验表明：PG对小鼠H₂₂肿瘤的生长具有显著抑制作用。PG对荷瘤小鼠免疫器官胸腺、脾脏具有增重作用，能够提高机体的非特异性免疫功能。PG对荷瘤小鼠肿瘤组织中VEGF的表达具有明显的抑制作用，且又能够升高血清IL-12的含量。提示PG抗肿瘤作用的机理之一可能是通过下调瘤组织VEGF的表达和上调血清IL-12的含量，从而抑制肿瘤血管生成，实现抗肿瘤作用。

关键词： 裴氏升血颗粒(PG)；H₂₂(肝癌)；血管内皮生长因子(VEGF)；白介素-12(IL-12)

裴正学系列方药的研究

ABSTRACT

Objective: By observing the effect of Peishishengxue Granules (PG) on the expression of VEGF in tumor and IL-12 in serum on H22 bearing mice to explore the mechanism of PG treatment of cancer medicine and to provide a scientific basis for the antitumor effects of the drug.

Methods: The models of solid tumor were developed by hepatoma cell H22 transplantation in mice. Divided into: normal group, model group, PG high-dose group, PG medium-dose group, PG low-dose group and ZG group. Except the normal and model groups were dealt with drug-intervention. After ten days, all mice were killed. The weights of solid tumor, thymus and spleen were measured. The tumor inhibiting rates, the thymus index (TI) and the spleen index (SI) were calculated. Assessing effects of PG on VEGF in tumor by immunohistochemistry method. Detected the concentration of IL-12 in serum by ELISA.

Results:

1. PG high, medium and low-dose group on H22 tumor-bearing mice showed significant inhibition of tumor weight. The average tumor weight compared with the model group were significantly different (p<0.01). The average tumor weight of PG high and medium-dose group compared with PG low-dose group have significant difference (p<0.05, or p<0.01). PG high, medium and low-dose group tumor inhibition rates were 36.26%, 37.56%, 24.91%.

2. The thymus index and spleen index of tumor-bearing mice dealt with PG various doses were higher than model group. The thymus index of PG high, medium and low-dose mice compared with model group significant difference (p<0.05, or p<0.01). PG spleen index of mice with various doses compared with model group significant difference (p<0.05, or p<0.01).

3. The expression of VEGF in tumor on PG different dose groups have less than the model group. PG high and medium-dose group compared with the model group were significantly different (p<0.05).

4. PG with various doses of IL-12 in serum concentrations higher than those in model group. PG high and medium-dose group compared with the model group were significantly different (p<0.05).

Conclusion: PG had remarkable restrain effect on tumor growth in H22 tumor-bearing model mice. PG has the function of weightening the immune organs (the thymus, the spleen). PG can improve the body's non-specific immune function. Experimental results suggest that: PG antitumor effect may be one of the mechanisms by inhibiting the expression of VEGF in tumor and regulating the content of IL-12 in serum.

Key words: Peishishengxue Granule (PG); transplanted liver cancer (H22); vascular endothelial cell growth factor (VEGF); interleukin-12 (IL-12)

裴正学系列方药的研究

前言

当今恶性肿瘤已成为危害人类生命健康的一类最严重的疾病。目前肿瘤的治疗仍以手术、放疗和化疗为主。手术治疗只能够切除肉眼可见的肿瘤，却对其复发和转移束手无策。而放疗、化疗在杀伤肿瘤细胞的同时，也损伤正常细胞，特别是可抑制骨髓造血功能和导致机体免疫功能低下。随着祖国传统医学的发展，在对中医药的不断研究发现：中医药在肿瘤的治疗方面具有多途径、多靶点、毒副作用小及不易产生耐药等优点。尤其在对抗肿瘤多因素、多环节致病性方面具有较大优势。中药抗肿瘤作用日益受到人们的重视，并已成为治疗肿瘤的重要辅助手段。

导师裴正学教授，结合自己四十多年的临床经验，认为"正虚"是恶性肿瘤发生、发展的根本原因；扶正固本是治疗恶性肿瘤的基本法则，在应用这一法则时以"健脾补肾"为其精髓；由此拟定"兰州方"，经40余年的不断实践、充实、重组，最后制成"裴氏升血颗粒"。此药多年来在肿瘤的临床应用中取得了令人满意的疗效，常用于各种肿瘤的治疗，尤其配合术前、术后、放化疗具有增效减毒副作用和提高机体免疫力之功。并且对于失去手术、放化疗时机的中晚期肿瘤患者，可缓解症状，提高生存质量。本实验研究目的在于客观地说明裴氏升血颗粒抗肿瘤及抑制肿瘤转移的作用，探究其作用机理，为该药的临床广泛应用提供科学依据。

一、立题依据

裴氏升血颗粒是我国著名中西医结合专家、博士生导师裴正学教授，集四十余年的临床经验，拟定的治疗白血病专方[1]。全方以健脾补肾、扶正固本为大法[2]。该方因在三十年前完全彻底治愈了急性单核细胞性白血病（M₅）患者马长生，在1974年苏州全国血液病会议上被定名为"兰州方"[3]。2003年，裴氏升血颗粒又成功治愈了一例白血病患者（L₂）刘力刚，先后在《南昌日报》及《甘肃日报》进行报道。1997年该方作为甘肃省医学科学研究院院内制剂，命名"裴氏升血颗粒"。该药剂之部分实验研究已通过了成果鉴定，曾获得甘肃省皇甫科技成果一等奖。

动物实验研究证明：裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠免疫器官胸腺、脾脏有明显增重作用，从而增强荷瘤小鼠非特异性免疫功能。裴氏升血颗粒可促进ConA刺激的脾淋巴细胞增殖能力，增强荷瘤小鼠机体的细胞免疫功能，提高抗肿瘤效应。能够促进IL-2的分泌以及IL-2和IFN-γ mRNA的表达，提示裴氏升血颗粒可以通过对细胞因子的影响调节机体的免疫功能[4]。裴氏升血颗粒能调节机体紊乱的免疫状态，可使荷瘤小鼠迟发过敏反应增强，增加荷瘤小鼠的细胞免疫功能，增强腹腔巨噬细胞吞噬功能，IL-1、IFN-γ、NO等细胞因子呈增高趋势[5]；裴氏升血颗粒对荷瘤小鼠肿瘤有明显抑制作用。裴氏升血颗粒可明显升高再障模型小鼠（经3.0GY直线加速器全身照射所建立）的外周血红蛋白、白细胞、血小板值，能明显恢复再障模型小鼠骨髓的造血功能[6]。免疫组化法检测脾脏CD4⁺、CD8⁺含量结果表明，裴氏升血颗粒可使再障模型小鼠脾脏CD4⁺含量呈增高趋势、CD8⁺含量呈降低趋势，增高CD4⁺/CD8⁺值，从而提高再障模型小鼠的免疫功能[7]。裴氏升血颗粒能够显著抑制突变型P53以及提高Caspase-3的蛋白表达，提示该药可以通过下调突变型P53和上调Caspase-3的蛋白表达，诱导肿瘤细胞的凋亡[8]。裴氏升血颗粒抑制NF-κB表达，影响基因转录功能，阻滞了肿瘤细胞G1期向S期的进程，诱导肿瘤细胞发生凋亡[9]。裴氏升血颗粒对由5-Fu引起的免疫器官胸腺和脾脏的抑制具有一定的拮抗作用，能通过增加免疫器官胸腺和脾脏的重量，维护机体的免疫机能，抵抗外来刺激因素的损伤[10]。裴氏升血颗粒使化疗后TNF-α及IFN-γ的浓度均较单纯5-FU组高，调节机体的免疫能力，从而抑制肿瘤生长[11]。薛氏[12]运用"兰州方"治疗原发性肝癌，使患者肿块明显缩小、肝功能完全恢复，提高了患者的生活质量、延长了患者的生存期；李氏等[13]运用兰州方配合化疗治疗癌症10例疗效观察显示：近期疗效兰州方组优于单纯化疗组（p<0.05）；从毒副反应看，兰州方组明显轻于单纯化疗组（p<0.01）。裴氏升血颗粒与核素并用治疗肝癌15例，治疗组用核素加服裴氏升血颗粒（PG），对照组仅用核素，发现治疗组毒副作用明显轻于对照组，二者之疗效对比亦有显著性差异[14]。本人跟师学习期间据不完全统计该方治愈食道癌3例、胃癌1例、白血病3例、再生障碍性贫血3例、原发性肝癌3例[15]。其中对食道癌、胃癌、肝癌、白血病、再生障碍性贫血等病之疗效显著。

鉴于裴氏升血颗粒具有显著的临床疗效，已成为省内外众所周知的血液病、肿瘤病之专剂。此剂虽然已经有了较多实验研究资料，但在分子生物学水平进行研究者尚嫌不足。近代医学研究表明：肿瘤血管生成是肿瘤生长和转移的病理基础。血管内皮生长因子（VEGF）是近年来发现的一种大分子活性物质，在血管通透性改变、血管内皮细胞增殖和血管形成中发挥重要的生物作用，与肿瘤的生长、浸润和转移密切相关。白细胞介素-12（IL-12）是一种免疫调节因子，也是一种血管生成抑制因子，具有多种生物学功能。IL-12在肿瘤、感染、自身免疫性疾病等防治中发挥着重要作用，可以抑制肿瘤血管的生成，阻止肿瘤的生长和转移，改善机体的免疫功能。本实验旨在通过建立小鼠H₂₂模型，观察裴氏升血颗粒对小鼠H₂₂瘤组织VEGF表达及血清IL-12含量的影响，从肿瘤血管生成方面探讨裴氏升血颗粒的抗肿瘤作用及中医药的抗肿瘤机制。

二、实验研究