关键词：方药研究 / 实验研究 / 配方资产 / 转化沟通 / 2.6 ELISA法测定血清IL-12的浓度
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2.6 ELISA法测定血清IL-12的浓度
摘除小鼠眼球采血，用干净试管收集血液，室温凝固2h，离心1500转10min，收集血清封装，-20℃冷冻保存。
IL-12浓度测定：按试剂盒说明操作。
试剂的准备：
- 标准品液制备：使用前每管中加入蒸馏水200μl溶解即可。
- 洗涤液：用重蒸水1:20稀释。
- 底物工作液配制：显色前5~10min将OPD片放入底物稀释液中溶解，每片加液5ml。
检测程序：
- 实验前20min从冰箱中取出试剂盒，以平衡至室温（20℃~25℃）。
- 从已平衡至室温的密封袋中取出所需板条。
- 建立标准曲线图：设标准孔8孔，每孔中各加入样品稀释液100μl，第一孔加标准品100μl，混匀后用加样器吸出100μl，移至第二孔。如此……
裴正学系列方药的研究
反复作对倍稀释至第七孔，最后，从第七孔中吸出100μl弃去，使之体积均为100μl。第八孔为空白对照组。四是加样：待测品种每孔各加入待测样品100μl。五是将反应板置37℃120min。六是洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤46次，向滤纸上印干。七是每孔中加入第一抗体工作液50μl。八是将反应板充分混匀后置37℃60min。九是洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤46次，向滤纸上印干。十是每孔加酶标抗体工作液100μl。十一是将反应板置37℃60min。十二是洗板同前。十三是每孔加入底物工作液100μl，置37℃暗处反应5~10min。十四是每孔加入50μl终止液混匀。十五是用酶标仪在450nm测定OD值，根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。
2.7 统计学方法
所有实验数据以均数±标准差（x̄±s）表示，应用SPSS17.0统计学软件进行数据统计，多组均数采用单因素方差分析（One-way ANOVA）。取P<0.05作为差异有显著意义水平。
3 试验结果
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