4.6 裴氏软肝消痞丸抑制突变型P53的表达

4.6 裴氏软肝消痞丸抑制突变型P53的表达

P53蛋白最早是1979年在SV40转化的细胞中被发现的，是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因，也是基因研究中最广泛最深入的抑癌基因之一。其与细胞的增殖、分化、凋亡、浸润、转移和代谢密切相关。人的P53蛋白由393个氨基酸组成，长约16～20kb，包含11个外显子和10个内含子，mRNA为2.8kb，分子量约为53KD，故取名P53。P53定位于染色体17p13.1，结构上可分为NH2端的反式激活域、中间的DNA结合域、COOH端的四聚体聚合域和调节域[103]。参与许多的细胞功能，如周期调控，DNA修复，细胞分化，基因组可塑性，程序性细胞死亡等[104]。

P53分为野生型P53（wt-P53）和突变型P53（mt-P53）两类。wt-P53被认为是肝细胞癌变过程中最为重要的一个抑癌基因[4]，具有维持基因稳定、抑制或阻止细胞转化的功能，故被誉为基因组的守护神或分子警察。wt-P53存在于核内，是一种核结合蛋白，正常情况下，P53活性很低，当DNA损伤或缺氧时，P53通过下面三种途径被激活：即磷酸化、乙酰化和泛素化。机体通过破坏P53与其负性调节蛋白MDM2之间的相互作用而使P53稳定来完成磷酸化过程；乙酰化和泛素化调控P53的机制目前尚不完全清楚。P53被激活后其活性和蛋白水平迅速升高，使依赖P53的周期素依赖激酶（CDK）抑制着P21和DNA修复基因（GADD45）上调性转录，细胞在G1期出现生长停滞，进行DNA修复。如修复成功，细胞进入S期；如修复失败，则通过bax基因使细胞进入凋亡，以保证基因组的遗传稳定性。mt-P53则不能在DNA损伤后通过P53介导的途径进入G1停滞和DNA修复，最终使遗传信息受损的细胞进入增殖期，导致恶性肿瘤的发生[105]。

研究发现P53基因中含有3个主要功能区：①NH2端转录激活区，可激活转录，介导蛋白间相互作用，这一区域还可与P53的负调控因子结合；②中央DNA核心结合区，这一区域具有特异性结合DNA的功能，并且是肿瘤细胞突变热点区域；③COOH端的四聚体聚合域和调节域非专一DNA结合区，包括核定位信号区（nuclear localization signal，NLS）和核输出信号区（nuclear export signal，NES），P53中有5个高度保守区，其中分别编码132-143、174-179、236-248、272-281号的氨基酸是突变热点，约有86.0%的P53基因突变是集中在这部分区域[106]。突变型P53不但丧失抑癌活性，并可能通过上调VEGF的表达，加快肿瘤的发生发展[107]。wt-P53在细胞中的半衰期为20min左右，但突变后的P53蛋白半衰期可延长至1.4～7h[108]，且使得蛋白更加稳定，并能够积聚下来，从而可被免疫组化法检测到[109]。

裴正学系列方药的研究

因此，用免疫组化法检测P53蛋白，是一个能提示P53有无突变的方法，甚至较基因序列分析更为敏感。本实验结果显示，治疗组mt-P53表达与对照组比较，均有不同程度的降低（p<0.05），表明软肝消痞丸下调了mt-P53表达，可能是该药抑制mt-P53在DNA复制水平上调节细胞生长，从而抑制或阻止细胞转录而达到抗癌作用。

综上所述得出以下结论：裴氏软肝消痞丸对小鼠H22肝癌的生长具有显著抑制作用；对荷瘤小鼠免疫器官胸腺、脾脏具有增重作用，能够提高机体的非特异性免疫功能；对荷瘤小鼠肿瘤组织中VEGF、wt-p53的表达具有明显的抑制作用。提示裴氏软肝消痞丸抗肿瘤作用的机理之一可能是通过下调肿瘤组织VEGF、wt-p53的表达，实现抗肿瘤作用。

结语