2 实验方法

2 实验方法

2.1 模型制备

严格按照无菌操作，参照文献从H22瘤株传代小鼠的腹腔抽取乳白色瘤液，用生理盐水稀释至瘤细胞计数为2×10⁶个/ml，应用碘酒和75%乙醇对每只小鼠右前腋处皮肤进行消毒，在消毒处皮下接种0.2ml瘤液。

2.2 动物分组、给药剂量及方法

将72只SPF级昆明小鼠按体重及性别随机抽取12只作为空白组，其余60只皮下接种肿瘤24h后称重，按随机分组法分为：模型对照组；裴氏软肝消痞丸（PRGXP）给药组（分为小、中、大三个剂量组）；复方斑蝥胶囊组（BM组）。按以下方法给药：

PRGXP组：成人口服量1袋/次，2次/d，6g/袋，按照60kg体重计算，成人给药0.2g/kg·d。小鼠灌胃给药量：

• PRGXP小剂量组：1g/kg体重，相当于成人临床用量的5倍
• PRGXP中剂量组：2g/kg体重，相当于成人临床用量的10倍
• PRGXP大剂量组：4g/kg体重，相当于成人临床用量的20倍

BM组：成人口服量3粒/次，2次/d，0.25g/粒，按60kg体重计算，成人给药量0.025g/kg·d，小鼠用药量相当于成人用药量的10倍，即0.25g/kg·d。

小鼠灌胃容积：0.2ml/10g。

裴氏软肝消痞丸与复方斑蝥胶囊分别用蒸馏水溶解制成为混悬液备用。实验组小鼠灌胃给予等容积的药物，模型对照组小鼠给予等量蒸馏水，1次/d，连续灌胃10d。

2.3 小鼠一般状态观察

观察各组小鼠自接种肿瘤细胞悬液起毛色、饮食、活动度及排泄等情况。

2.4 抑瘤率的测定

末次给药后24h，脊髓脱臼处死小鼠，称重后迅速剥离瘤体，电子天平称重瘤体，计算各组瘤重的平均值，以给药组瘤重与对照组比较，计算抑瘤率。

抑瘤率（%）=[（模型组平均瘤重-治疗组平均瘤重）/模型组平均瘤重]×100%

裴正学系列方药的研究

2.5 胸腺、脾脏指数测定

同上，末次给药24h后，脊髓脱臼处死小鼠并称重，剖腹取出胸腺及脾脏后分别称重。

按公式计算胸腺、脾脏指数：

胸腺指数(mg/10g)=胸腺重/(小鼠结束体重-瘤重)×10

脾脏指数(mg/10g)=脾脏重/(小鼠结束体重-瘤重)×10

2.6 肿瘤组织中P27、Bcl-2蛋白表达的检测

断颈处死小鼠，剥离瘤体，继而剥离附着肿瘤体上的结缔组织留取瘤组织，用10%甲醛固定，脱水，用石蜡包埋。