6.1 材料与方法

6.1 材料与方法

6.1.1 药品

消风Ⅱ号胶囊，内装棕色粉末，100粒/瓶，每粒为0.375g，临床应用量为2.25g/60kg。大鼠给药剂量为成人临床用量的5倍、10倍。由兰州中药厂提供。

6.1.2 动物

Wistar雄性大鼠，体重180～200g，由兰州大学实验动物中心提供，合格证号：医动字第14-006号；环境设施合格证号：医动字第14-018号。实验室环境：温度20℃～22℃，相对湿度：45%～55%。

6.1.3 试剂及其配制

6.1.3.1 试剂：

• 卡介苗(50mg/支)，上海生物制品研究所
• 地塞米松磷酸钠注射液，天津药业焦作有限公司
• 雷公藤多苷片（10mg/片），黄石飞云制药有限公司
• 羊毛脂，Sigma（由兰州轻工化工研究所馈赠）
• 液体石蜡，天津市化学试剂第二厂

6.1.3.2 Freund's完全佐剂的制备： 取液体石蜡10g和羊毛脂5g加热至70℃熔融振摇，高压灭菌。临用前在无菌操作台内，针管吸取熔融液10ml加入经56℃灭活的卡介苗100mg，将两只20ml无菌注射器接通来回推拉，充分混匀乳化，直至将其滴在水面上呈半球形不散开为止，即为Freund's完全佐剂，备用。

6.1.4 仪器

JA-2003千分之一电子天平、S-648D电热恒温水浴箱、SW-CJ-1F生物净化工作台（苏州净化设备器厂）、0-125mm游标卡尺。

6.1.5 实验方法

6.1.5.1 AA大鼠模型及去肾上腺AA大鼠模型的建立

取大鼠用3.3%水合氯醛麻醉后摘除双侧肾上腺，并饮用糖盐水。第3d后试验前用游标卡尺测量每只大鼠的左、右后肢踝关节基础周长值，消毒后于每鼠左后肢足趾皮内注射Freund's完全佐剂0.1ml。另取正常大鼠按上述方法注入完全佐剂0.1ml。

6.1.5.2 消风Ⅱ号胶囊对去肾上腺和非去肾上腺AA大鼠继发病变的预防实验

取去肾上腺AA大鼠24只，随机分成去肾上腺模型对照组、消风Ⅱ号胶囊低剂量组(188mg/kg组)、高剂量组(375mg/kg)；另取AA大鼠24只，分组同上。致炎7d后每日灌胃给药1次，连续灌胃给药7d，灌胃容积为1.0ml/100g体重，模型对照组给予等容积的蒸馏水。每3d测量一次大鼠的左、右后肢踝关节周长，计算踝关节肿胀度及肿胀抑制率。同时观察体重变化、前肢、耳和尾部病变发生率和严重度。并按5级评分法评分，计算病变发生抑制率。

踝关节肿胀度(cm)=致炎后踝关节周长-致炎前踝关节周长

踝关节肿胀抑制率(%)=（对照组平均踝关节肿胀度-给药组平均踝关节肿胀度)/对照组平均踝关节肿胀度×100%

病变发生抑制率(%)=（对照组病变发生平均分值-给药组病变发生平均分值）/对照组病变发生平均分值×100%

6.1.5.3 消风Ⅱ号胶囊对去肾上腺和非去肾上腺AA大鼠继发病变的治疗实验

给药剂量和途径同6.1.5.2。致炎后第7天开始用药，连续21d，并每3d测量一次试验组大鼠的左、右后肢踝关节周长，计算踝关节肿胀度及肿胀抑制率。同时观察体重变化、前肢、耳和尾部病变发生率和严重度。并按5级评分法评分，计算病变发生抑制率。试验结束时，称大鼠体重。

6.1.5.4 病理组织学检查

试验结束时，每组各取3只大鼠的后肢左、右足爪，剥皮后，用8%甲醛固定。将固定的骨组织放入5%硝酸水溶液中浸泡24h，脱水，包埋，切片，HE染色，并进行组织学检查。

6.1.5.5 统计学方法

所有数据用SPSS12.0统计软件中的单因素方差分析法进行统计。