8 消风Ⅱ号胶囊对AA大鼠炎性组织中PGE₂及NO含量的影响

8 消风Ⅱ号胶囊对AA大鼠炎性组织中PGE₂及NO含量的影响

消风Ⅱ号胶囊的药效学提示其具有明显抑制AA大鼠继发病变的预防和治疗作用，同时该药对急慢性炎症均有一定的抗炎作用，并可提高小鼠痛阈值，镇痛作用持久；该药还可减少醋酸诱导的小鼠扭体次数，延长出现扭体的潜伏时间。表明消风Ⅱ号胶囊具有较好的治疗类风湿关节炎的作用。本实验在药效学实验的基础上，探讨了消风Ⅱ号胶囊治疗AA大鼠继发病变的可能机制。

8.1 材料与方法

8.1.1 药品

消风Ⅱ号胶囊，内装棕色粉末，100粒/瓶，每粒为0.375g，临床应用量为2.25g/60kg。大鼠给药剂量为成人临床用量的5倍、10倍。

8.1.2 动物

Wistar雄性大鼠，体重180～200g，清洁级，由甘肃省医学科学研究院实验动物中心提供，小鼠合格证号：医动字第14-06号；环境设施合格证号：医动字第14-018号。实验室环境：温度20℃～22℃，相对湿度：45%～55%。

8.1.3 试剂

8.1.3.1 试剂

卡介苗（50mg/支）（上海生物制品研究所）；地塞米松磷酸钠注射液（天津药业焦作有限公司）；雷公藤多苷片（10mg/片）（黄石飞云制药有限公司）；羊毛脂，Sigma（由兰州轻工化工研究所馈赠）；液体石蜡（天津市化学试剂第二厂）；磺胺（上海试剂二厂生产）；磷酸（北京化工厂）；萘乙二胺（北京化学试剂公司生产）；甲醇（天津化学试剂六厂三分厂生产）；氢氧化钾（北京化工厂生产）；亚硝酸钠（北京化学试剂公司生产）。

8.1.3.2 试剂配制

8.1.3.2.1 Freund's完全佐剂的制备： 取液体石蜡10g和羊毛脂5g加热至70℃熔融振摇，高压灭菌。临用前在无菌操作台内，针管吸取熔融液10ml加入经56℃灭活的卡介苗100mg，将两只20ml无菌注射器接通来回推拉，充分混匀乳化，直至将其滴在水面上呈半球形不散开为止，即为Freund's完全佐剂，备用。

8.1.3.2.2 Griess溶液配制： A液：磺胺1.0g，加蒸馏水97.5ml溶解，再加磷酸2.5ml混匀。B液：1%萘乙二胺溶液，称取萘乙二胺1.0g加蒸馏水至100ml溶解。临用前将A液与B液1:1混匀使用。

8.1.3.2.3 0.5mol/L KOH-甲醇溶液配制： 称取氢氧化钾10.0g，置500ml的容量瓶中，加甲醇至500ml完全溶解备用。

8.1.3.2.4 亚硝酸钠标准曲线溶液配制： 先配制1mmol/L亚硝酸钠标准溶液，倍比稀释成100μmol/L、50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L、6.25μmol/L。

8.1.4 仪器

日本岛津UV-240紫外分析仪、721型分光光度仪、JA-2003千分之一电子天平、S-648D电热恒温水浴箱、SW-CJ-1F生物净化工作台、TDL-5M台式大容量冷冻离心机、0～125mm游标卡尺。

8.1.5 实验方法

8.1.5.1 AA大鼠模型的建立及实验分组给药方法

将适应环境7天的大鼠消毒后于每鼠左后肢足趾皮内注射Freund's完全佐剂0.1ml。将AA大鼠随机分成模型对照组、消风Ⅱ号胶囊低剂量组（188mg/kg）、高剂量组（375mg/kg），同时设正常对照组。致炎第7天开始灌胃给予药物，灌胃容积为1.0ml/100g体重，模型对照组给予等容积的蒸馏水，连续给药21d。

8.1.5.2 AA大鼠炎性组织中PGE₂含量的测定

给药结束后次日处死大鼠，在大鼠后肢踝关节上5mm处剪下左、右炎性肿胀足爪，称重、剪碎后放在5ml的生理盐水的离心管中浸泡2h。取出足爪，3000转/min离心10min，吸取上清液0.1ml，加0.5mol/L KOH-甲醇溶液2ml在50℃的水浴中异构化20min，取出后置冰水中终止反应，在紫外分光光度仪278nm处测其光密度（OD）值，以异构化的KOH-甲醇溶液作空白。

裴正学系列方药的研究

对照，并以每克炎性组织相当的吸收光密度值表示PGE₂的含量。