2.4 淋巴细胞增殖活性测定

2.4 淋巴细胞增殖活性测定

脾细胞悬液制备： 无菌取脾，放入PBS液中涮洗后，用两块载玻片轻轻捻碎，经200目尼龙布过滤，得到单个细胞悬液[23]。再用淋巴细胞分离液提取淋巴细胞[24]，调细胞浓度至1×10⁷个/ml[25]。

淋巴细胞增殖活性测定： 取上述制备的脾淋巴细胞悬液（1×10⁶个/ml）加入96孔板中，每孔100μl，设4个复孔，其中2孔分别加入含ConA的1640培养液100μl（ConA的终浓度7.5μg/ml）[26]，另2孔分别加入1640培养液100μl，置37℃含5%CO₂的培养箱中培养72h，终止培养前6h，每孔加入MTT液（5mg/ml）15μl，继续培养。培养结束后，离心（2000rpm，10min，室温），弃上清，每孔加入150μl DMSO，振荡使结晶完全溶解，于酶标仪上测A₄₉₀值[27]。