2.7 细胞凋亡率及细胞周期测定

2.7 细胞凋亡率及细胞周期测定

在无菌条件下，取新鲜瘤组织0.5cm³，放入平皿中，用磷酸缓冲液（PBS）除去瘤组织表面的血液及血凝块，加入少量PBS；用眼科剪将组织剪至匀浆状，加入5ml PBS；用吸管吸取组织匀浆，用200目尼龙网过滤到试管内；离心沉淀1000r/min，5min。再用PBS液洗三次，每次以800r/min的低速离心5min除细胞碎片；以350目尼龙网过滤去除细胞团块，取单细胞悬液200μl，加入75%的乙醇0.5ml，在4℃固定12h，用PBS液洗去固定液，2~3次，离心1000r/min每次10min，弃上清留沉淀。细胞计数在1×10⁶个/ml以上，取悬液50μl加入碘化丙啶1000μl染色30分钟。准备上机检测[22-24]。