2.6 流式细胞术测定细胞凋亡率及细胞周期 PI染色法

2.6 流式细胞术测定细胞凋亡率及细胞周期(PI染色法)

在无菌条件下，取新鲜瘤组织0.5cm，放入平皿中，用磷酸盐缓冲液（PBS)除去瘤组织表面的血液及血凝块，加入少量PBS；用眼科剪将组织剪至匀浆状，加入5ml PBS；用吸管吸取组织匀浆，用200目尼龙筛网过滤到试管内；离心沉淀1000r/min，5min。再用PBS液洗3次，每次以800r/min的低速离心5min除细胞碎片；以350目尼龙网过滤去除细胞团块，取单细胞悬液200ul，加入75%的乙醇0.5ml，在4℃固定12h，用PBS液洗去固定液，2~3次，离心1000r/min每次10min，弃上清留沉淀。细胞计数在1×10⁶个/ml以上，取悬液50ul加入碘化吡啶15ul染色30min。上流式仪检测。