中文摘要

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目的： 通过对裴氏升血颗粒的实验研究，证明该药对再障小鼠外周血、脾脏CD4⁺、CD8⁺含量及CD4⁺/CD8⁺值的影响，并观察脾脏在用药前后的病理变化，了解裴氏升血颗粒对再障小鼠免疫系统的作用，从而探讨其可能机理，为该药临床广泛应用提供科学、微观的依据。

方法： BALB/C小鼠90只，体重(20±2)g，随机分为6组：裴氏升血颗粒大、中、小剂量组（以下分别简称为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组）、贞芪扶正颗粒对照组（以下简称为Ⅳ组）、模型组（以下简称为Ⅴ组）和正常对照组（以下简称为Ⅵ组），每组15只，除正常对照组外，其余75只小鼠均经3.0GY直线加速器γ射线全身照射，照射4小时内输入取自DBA/2小鼠胸腺、淋巴结细胞悬液。照射一周后通过检测血象、骨髓象，证明造模成功。各组用药20d、40d分别检测血象，实验结束后取小鼠脾脏，采用免疫组化法测CD4⁺、CD8⁺含量及CD4⁺/CD8⁺的值，并观察各组脾脏病理组织学变化。

结果： 裴氏升血颗粒能明显升高再障模型小鼠外周血白细胞、血小板、血红蛋白值，对红细胞升高不显著。脾脏CD4⁺含量呈增高趋势、CD8⁺含量呈降低趋势，同时提高CD4⁺/CD8⁺值。脾脏病理学观察表明，裴氏升血颗粒可减轻模型小鼠脾脏病理学改变，明显降低脾脏淋巴细胞的凋亡率，促进生发中心恢复。

结论： 裴氏升血颗粒作用机制可能是多环节的：血分析结果显示，裴氏升血颗粒可明显升高再障小鼠外周血白细胞、血小板、血红蛋白值；免疫功能评价表明，裴氏升血颗粒能调节机体紊乱的免疫状态，提高CD4⁺、降低CD8⁺的数量和活性，从而调整CD4⁺/CD8⁺值，减少IL-2、IFN-γ、TNF-α等造血负调控因子的释放以解除对骨髓造血的抑制；脾脏病理切片提示，裴氏升血颗粒对再障小鼠脾脏病理有显著改善作用。

关键词： 再障；血分析；CD4⁺；CD8⁺；脾脏病理

裴正学系列方药的研究

ABSTRACT

Objective: To study the immune effects of Peishengxue Granule (PG) which impacts on AA mouse. The hemogram and the content of CD4, CD8 was analyzed. Meanwhile, the value of CD4 over CD8 was measured. Pathologic histology of the spleen of AA mice was observed. We try to discuss the probable mechanism of PG and provide scientific and microcosmic proof for clinic application.

Methods: 90 BALB/C mice, weighing (20±2)g, were divided into six groups at random: high dose group of PG (group I is the abbreviation); medium dose group of PG (group II is the abbreviation); low dose group of PG (group III is the abbreviation); Zhenqifuzheng Granule group (ZG) (group IV is the abbreviation), model group (group V is the abbreviation), and natural group (group VI is the abbreviation). Each group has 15 mice. 75 mice were irradiated by 3.0GY γ ray from Beeline accelerator for whole body except those of group VI. Then they were injected with cell suspension from thymus and lymphocyte of DBA/2 mice within four hours. The AA model was proved successful by analysing the hemogram and medulla a week later. Treat them with different medicine for 20 days and 40 days, hemogram was measured separately. When the experiment finished, the content of CD4, CD8 and the value of CD4 over CD8 in the spleen was measured. The pathologic histology sections of the spleen were observed.

Results: PG improved the value of WBC, PLT and HGB in the peripheral blood significantly. The content of CD4 increased and the content of CD8 decreased, so the value of CD4 over CD8 increased. Pathologic histology sections of the spleen showed they were improved evidently. The apoptosis rate of the lymphocyte reduced, and the accruement center revived.

Conclusion: The mechanism in treatment of PG may has several aspects. It has the function of improving the value of WBC, PLT and HGB in the peripheral blood; it may reduce IL-2, TNF-α, IFN-γ which were negative factors for hematopoiesis by increasing the quantity and activity of CD4 and decreasing the quantity and activity of CD8; it can ameliorate the pathologic histology changes of the spleen.

Keywords: AA; hemogram; CD4; CD8; the spleen pathology

前言

自1898年Paul首次报道再生障碍性贫血（AA，简称再障）以来，人们经过100多年的探索，逐步加深了对本病的认识。再障是由于化学、物理、生物及若干不明因素引起的骨髓造血功能减退或衰竭。该病以造血干细胞损伤、外周血全血细胞（红细胞、粒细胞、血小板）减少为

裴正学系列方药的研究

特征。根据起病的急缓和病情的轻重，可分为急、慢性两种。急性型的特点是，初起贫血并不明显，常以出血、感染、高热为首发症状，但病情进展快，贫血呈进行性加重，出血严重而广泛，不仅皮肤、黏膜、眼底出血，且常伴有内脏出血，感染多见于口腔、咽、皮肤及肛门周围，以及由肺炎、败血症等引起的高热，病程凶险，患者常在短期内因感染或内脏出血而死亡。慢性型起病缓慢，贫血、感染、出血等症状均相对较轻[1]。

现代医学对本病病因尚未全部阐明，可由毒物、药物、放射性物质、严重感染、骨髓肿瘤或白血病等引起或诱发，致骨髓造血功能遭受影响或破坏。临床上常表现为较严重的贫血、出血和感染，三系细胞同时减少，多无肝脾或淋巴结肿大。多数学者认为本病的发病机制是多种原因引起的骨髓造血干细胞缺陷、免疫机制异常及造血微环境障碍。病理变化主要为红骨髓的脂肪化，有造血功能的红骨髓被脂肪所取代，取代的数量越大则贫血越严重。根据起病缓急、病情轻重、骨髓破坏程度和转归等，分为急性和慢性两型。在我国经部分地区调查，每10万人中有1.87～2.1人发病，与日本报道的发病率相近。各年龄组均可发病，但以青壮年多见，男性多于女性。急性型与慢性型病例的比例为1:4.6。

再生障碍性贫血属中医学"血虚"、"血证"、"虚劳"、"虚损"及"血枯"等范畴。急性再障属于"急劳"、"热劳"、"血证"，慢性再障属于"虚劳"、"血虚"、"血证"等。中医认为，血与气、血与精的关系密切。气属阳，血属阴，血液的生成有赖于气，气可生血，血可化气，精血互化。精系生命之根本，闭藏于肾中，肾精生髓，精髓能化生血液。如《诸病源候论·虚劳病诸候》说："肾藏精，精者血之所成也。"《素问·阴阳应象大论》说："肾主骨生髓""血为精所化"，说明肾、骨髓、血液三者之间的关系，特别是骨髓与造血有直接关系，肾之功能强弱与否，影响骨髓生精造血，故祖国医学认为造血的骨髓与肾有密切关系。《灵枢·决气篇》说："中焦受气，取汁变化而赤是谓血。"《素问·脉要精微论》说："夫脉者，血之府也。"血液的生成有两条途径，即水谷精微化血和肾精化血。《灵枢·营卫生会》说：中焦"泌糟粕、蒸津液，化其精微，上注于肺脉，乃化而为血，以奉生身，莫贵于此。"《侣山堂类辨·辨血》说："血乃中焦之汁，流溢于中以为精，奉心化赤而为血。"血液周而复始，循环不息，灌溉于全身，《素问·经脉别论》说："食气入胃，浊气归心，淫精于脉，脉气流经，经气归于肺，肺朝百脉，输精于皮毛。"《张氏医通·诸血门》说："气不耗，归精于肾而为精；精不泄，归精于肝而化清血。"肝藏血以生气血，能储藏食物中的精微物质，作为造血原料，肝也与造血有关。总之，血液的生成主要与肾、脾、肝三脏有关。

本实验通过研究裴氏升血颗粒对再障小鼠免疫系统的影响，并初步探讨其作用机理。裴氏升血颗粒是全国著名中西医结合专家、导师裴正学教授根据多年临床经验，研制出具有补肾生髓、健脾益气、养血和胃功效的颗粒冲剂，在临床实践中取得满意的疗效，为进一步肯定疗效并探讨机理，立题进行实验研究。

研究进展

中医药治疗再生障碍性贫血的免疫调控机理研究进展[4]如下：姚氏[5]等利用BALB/C小鼠经亚致死量的射线照射，并输入取自DBA/2小鼠的胸腺淋巴结细胞，成功研制了免疫介导型再障的动物模型。这种动物模型比较符合再障的免疫发病机制，因此很多中医研究人员用此动物模型进行研究。动物实验验证了中医药治疗再障是通过调整T细胞免疫功能、刺激造血集落形成、影响造血细胞的增殖、分化来实现的。为了进一步研究中医药治疗再障的作用机理，周氏等[6]在成功改良复制免疫介导再障小鼠模型的基础上，观察了生血合剂对免疫介导再障小鼠动物模型的作用，结果表明：生血合剂能降低再障小鼠死亡率，增加外周血象、骨髓有核细胞；增高Th（CD4）百分值、Th/Ts（CD4/CD8）比值、IL-3、IL-2R；降低Ts（CD8）、IL-2、IFN-γ水平和脾细胞IFN-γ基因表达。史氏等[7]以此再障模型用益气活血、温补脾肾、扶正解毒中药煎取液灌胃，结果表明这些方药都能不同程度提高再障小鼠的Th细胞，降低Ts细胞，使Th/Ts比值升高，减轻免疫异常对骨髓造血细胞的抑制和损伤，有利于再障骨髓造血的修复和重建。

1 病因及发病机制